杆状病毒AcMNPV的p6.9基因在病毒复制过程中的功能研究

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杆状病毒在所感染的昆虫宿主细胞中装配时,会进行DNA的压缩和包装。有研究表明这与杆状病毒自身编码的P6.9蛋白有关。该蛋白是一种富含精氨酸和丝氨酸的小蛋白,在功能上类似于组蛋白,根据病毒种类不同,大小在49氨基酸到109氨基酸之间。目前已测序的共50多种杆状病毒基因组中都有p6.9基因,显示了p6.9基因在杆状病毒进化过程中的保守性。本论文以AcMNPV为例,对杆状病毒p6.9基因的功能进行研究。第一章:文献综述。概括介绍了杆状病毒生物学、分子生物学研究进展和应用研究情况,并对杆状病毒的p6.9基因进行了介绍。最后介绍了本论文的目的和意义。第二章:AcMNPV p6.9基因的克隆、原核表达和抗体制备。将p6.9基因编码区克隆至原核表达载体pMAL-c2x,获得pMAL-p6.9表达质粒,经IPTG诱导,MBP-P6.9蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,将表达产物纯化,免疫家兔制备了AcMNPV P6.9蛋白的抗血清。第三章:缺失p6.9基因的AcMNPV重组病毒的构建及其回复拯救。利用Bac-to-Bac操作系统,构建了缺失p6.9基因的重组Bacmid vAcp6.9-ko,利用转座方法得到拯救型,缺失型和野生型Bacmid:vAcph-gfp-p6.9-rep, vAcph-gfp-p6.9-ko与vAcph-gfp。将三种Bacmid同时转染和感染Sf9细胞系.结果发现,缺失了p6.9基因的AcBacmid不能完成病毒的整个复制过程,而拯救型和野生型却可以,且具有相似的复制动力曲线。这表明p6.9基因是AcMNPV复制的必需基因,其在AcMNPV感染细胞过程中起重要作用。第四章:进行了总结和讨论。
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