论文部分内容阅读
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，Ct)是目前国内外最常见的性病病原体之一，也是非淋球菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis，NGU)的主要病原体。据世界卫生组织估计，每年有9300万新发病例，给社会造成严重的经济负担。泌尿生殖道Ct感染的发病率在我国有逐年增加的趋势，已成为危害公共健康的一大问题。泌尿生殖道的Ct感染可引起多种疾病，除引起非淋菌性尿道炎外，还可引起多种并发症。目前认为Ct的致病性与其不同型别有关，至今已发现19种Ct血清型。常用的Ct分型方法有血清学分型和基因分型两种，其中血清分型繁琐、耗时，且需培养传代获得高浓度的抗原，限制了其广泛应用；基因分型能在较短时间内获得相应结果而取代血清分型，成为目前Ct分型的主要方法。Ct的基因分型是检测特定型别的流行动态、临床判定治疗与再感染、流行病学调查等各方面研究的基础，同时对建立Ct不同基因型与不同临床过程的关系、推断来源、判断预后等都有着重要作用。此外，Ct基因分型多以主要外膜蛋白基因(即omp1基因)为基础，因而能够为omp1遗传变异机制的研究提供有益信息，从而有利于Ct疫苗的研制。目的：通过培养法和PCR法分离得到Ct临床株，以PCR-RFLP法对获得的临床标本进行基因分型，了解本地区性病门诊Ct的基因型分布，并探索其临床过程与基因型的关系。在Ct E型标准株培养的基础上，建立一套适应于我所实验室的成熟可行的Ct临床株培养筛查方法，保留Ct临床株，为进一步深入研究奠定基础。方法：收集了2005年4月～2005年12月期间到天津市性传播疾病研究所门诊就诊患者的尿道或宫颈拭子213例，所有患者均符合采集标准，并记录其临床相关资料。在Ct E型标准株培养的基础上行临床标本的细胞培养，对阳性标本行PCR扩增出omp1基因。同时用质粒PCR筛选阳性临床标本，PCR扩增得到omp1基因。用AluⅠ和MspⅠ内切酶酶切omp1基因，10％聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳后与各型Ct标准株理论酶切后的结果比较得出分型结果，并总结Ct型别与患者临床过程和特点的相关性。结果：首先培养临床标本共得到27例阳性临床株，同时用质粒引物扩增临床标本，阳性标本再经PCR扩增得到omp1基因，共得到33例阳性临床株可用于RFLP基因分型。经分型共检出5个基因型，其中E型25例、F型2例、D型1例、G型3例、J型2例。比较E型与其它各型在不同年龄段的分布上有统计学上的显著差异，而在性别、病程、有无非婚性接触、学历等各方面无统计学上的显著差异。结论：1、成功地应用PCR-RFLP技术对我科性病门诊的沙眼衣原体临床株分型2、我科性病门诊的Ct基因型以E型为主，与国内外其它地区报道基本一致，但尚需进一步扩大样本量观察3、成功地摸索出临床株Ct培养的方法，保留下菌株，为Ct免疫机制、致病机理、药物敏感性试验、动物模型、保护性疫苗等方面的研究奠定基础。