研究背景和目的：急性高原病（AMS）的发生是一个多基因、多因素参与的复杂过程，受遗传和环境双重影响。高原病的发生发展呈现明显的种族和个体差异性。青藏高原是目前世界上高原面积最大、海拔最高、居住人口最多的高原地区。我国中西部约有1/2是高原地区，有115个行政县位于海拔3000m以上的高原，其中四大高原（青藏高原、内蒙高原、云贵高原以及黄土高原）的居住人口在6000～8000万左右。目前，随着高原地区经济建设、高山旅游业的蓬勃发展以及军事战略意义日趋突出，越来越多的人群从平原通过各种方式进入高原。但是由于恶劣的地理环境和自然气候，各种类型的高原病时有发生，尤其是急性高原病严重影响了平原地区与高原地区的人口流动，长期以来阻碍了相互间的贸易交流、交通建设和资源开发，严重制约了高原地区经济建设和社会发展。有研究表明，在急进至海拔2500米以上人群中AMS的发病率约为10%，4500米以上则超过60%，严重者还可能转化为急性重症高原病，即高原肺水肿及脑水肿，有着较高的致残率和致死率。由于高原地区医疗环境及技术的限制，特别是部分急性重症病人不能有效地开展现场急救，严重危及患者生命。这对如何积极有效地防治急性高原病的发生提出了严峻的挑战。近年来，随着国家对高原病卫生事业的重视，有关高原病的研究也取得了一定成果。其中以表观遗传学，基因多态性等遗传作为研究背景材料的课题更是受到各国学者的重视。目前，个体遗传背景同急性高原病易感性之间的关系还不是十分清楚，分子机制也尚不明确。我们试图通过寻找高原病相关调控基因多态性的方法来解答这一问题，利用AMS病例对照设计研究，阐述基因多态性同AMS易感性之间的关系，从而为急性高原病的早期预防提供理论依据。急性缺氧是高原病发生的始动环节，而缺氧诱导因子HIF，作为缺氧应答的全局性调控因子，在急性高原病的发生发展过程中起到了非常关键的调控作用。EPAS1（HIF2α）、EGLN1（HIFPH2）基因作为HIF调节通路上的靶基因，其遗传变异很可能会引起机体对于缺氧适应性方面的改变。研究表明，EPAS1、EGLN1基因多态性的改变与血红蛋白含量改变，血管生成及通透性改变，血流动力学改变等有关，而这些变化都同高原适应有些非常密切的关系。近年来随着大规模全基因组扫描(GWAS)技术及基因测序等一系列检测方法的问世，通过高原世居藏族人群同平原汉族人群对照研究中的应用表明，EPAS1、EGLN1等基因与高原适应性和高原病有很强相关性。目前，关于EPAS1、EGLN1基因同高原适应的相关性已有文献报道，但是文献中所涉及的病例对照研究基本上均为高原地区世居藏族人群同平原汉族人群不同种族之间的比较，而单纯的在平原汉族人群中该两个基因SNP位点多态性同急性高原病易感性间有无关联性尚待考证。为此，本实验拟通过对急性高原病病例对照研究，应用聚合酶链反应扩增及连接酶检测（PCR-LDR）方法对SNP进行基因分型检测，试图发现EPAS1、EGLN1基因遗传变异与急进高原人群在缺氧环境暴露中高原病发病的关联性，并在此基础上探讨SNP位点和EPAS1、EGLN1基因调控机制。本研究样本来源相同，进入高原的时间和海拔高度一致，通过比较其是否发病，以及发病的严重程度等，为急性高原病的预警等提供依据。材料与方法：1.本研究选取2012年7月由重庆（海拔300米）空运急进至拉萨（海拔3700米）的健康男性青年。根据急性高山病路易斯湖国际诊断计分系统（LLS）对受试人群进行评分，其中AMS病例组80人，平均年龄（20.54±0.26）岁；对照组86人，平均年龄（21.02±0.25）岁；均来自中国平原地区且无血缘关系汉族人群。2.抽取每位研究对象空腹肘静脉血5ml， EDTA-K2抗凝管采集后随即在室温下用TD4台式离心机3000转/分离心10分钟，用移液器分离血浆及血细胞，存于无菌干燥冻存管中，标注编号并放入液氮罐中冻存。血细胞利用Tiangen DP319-02DNA抽提试剂盒（中国天根公司）提取基因组DNA。3.从病例组和对照组中随机选取各20例血标本，分别对EPAS1基因rs2044456、rs4953348、rs4953361位点，EGLN1基因rs2153364、rs479200位点目的基因片段进行测序。4.分别收集80名AMS病例组及86名对照组受试人群，对EPAS1基因位点rs2044456、rs4953348采用聚合酶链反应扩增及连接酶检测（PCR-LDR）技术对其进行基因分型检测。LDR反应产物在ABI3730XL测序仪下测序分析。结果：1.比较急性高原病病例对照受试人群，两组间性别、年龄、体重指数（BMI）、吸烟史、饮酒史均无统计学差异（P＞0.05）。对于反应AMS的临床客观指标心率及血氧饱和度，在平原病例对照组间心率及血氧饱和度水平均无统计学差异（P＞0.05）。高原AMS病例组心率平均水平明显高于对照组（P＜0.01）；而AMS病例血氧饱和度平均水平则明显低于对照组（P＜0.01）。2.我们对EPAS1基因位点rs2044456、rs4953348、rs4953361及EGLN1基因位点rs2153364、rs479200目的基因片段进行了测序,并未发现其紧邻上下游存在其他多态性的位点。我们将各个选定位点的基因型及等位基因频率统计如下：EPAS1基因位点rs2044456、rs4953348、rs4953361均检测出AA、AG、GG基因型。其中rs2044456位点A、G等位基因频率在病例组分别为0.4、0.6，在对照组中为0.3、0.7；同样的，rs4953348位点A、G等位基因频率在病例组分别为0.15、0.85，在对照组中为0.3、0.7；rs4953361位点A、G等位基因频率在病例组分别为0.5、0.5，在对照组中为0.45、0.55。EGLN1基因位点rs2153364、rs479200均检测出CC、CT、TT基因型。rs2153364位点C、T等位基因频率在病例组中分别为0.55、0.45，在对照组中为0.35、0.65；rs479200位点C、T等位基因在病例组和对照组中频率均为0.4、0.6。3.我们从中选取了EPAS1基因rs2044456、rs4953348位点，在80例AMS病例组及86例对照组样本中，采用PCR-LDR技术对其进行基因分型检测。并且我们对危险因素（BMI、吸烟史、饮酒史）及年龄、心率、血氧饱和度同基因型与AMS的发病情况进行了Logistic回归分析以排除该因素的干扰。结果发现rs2044456位点基因型及等位基因频率组间差异无统计学意义（P＞0.05）。rs4953348位点AG基因型频率同GG基因型频率相比组间差异具有统计学意义（OR=0.453，95%CI0.226～0.908，P=0.026）；AMS组A等位基因频数显著低于对照组（25.0%vs35.5%，OR=0.607，95%CI0.377～0.975，P=0.039）。提示rs4953348位点基因型及等位基因可能与AMS发病有关联性。4.分别比较各位点不同基因型心率及血氧饱和度水平，发现该两个位点不同基因型高原心率水平均无统计学差异（P＞0.05）。rs2044456位点GG基因型高原血氧饱和度水平明显高于AG基因型水平（P＜0.05）；而rs4953348位点AG基因型高原血氧饱和度水平则明显高于GG基因型水平（P＜0.05）。结论：1.在中国平原汉族人群中，EPAS1基因rs4953348位点多态性同AMS发病易感性相关，携带AG基因型的人群患AMS的风险性可能较携带GG基因型人群低，而A等位基因则可能是中国平原汉族人群AMS发病的保护性因素。2.EPAS1基因rs2044456位点多态性同AMS发病无关联性。3.各位点不同基因型可能同高原血氧饱和度水平有关联性。