奶牛乳房炎是全世界引起奶业重大经济损失的、最常见的疾病之一。此病可以由多种细菌感染所引起,其中金黄色葡萄球菌(S.aureus)是最主要的致病菌。以往主要采用抗生素控制和治疗S.aureus引起的奶牛乳房炎,但由于抗生素的广泛使用和滥用,致使耐药菌株不断出现,且药物在奶中残留给食品安全造成了威胁。因此,研究和使用疫苗来防制S.aureus感染已成为热点。但研究证明,S.aureus灭活苗、荚膜多糖结合苗等免疫效果不理想;抗原亚单位疫苗虽然有一定免疫保护效果,但存在着细胞免疫应答弱、生产工艺复杂等缺点。因此,本研究拟利用大肠杆菌Lpp’OmpA来表面展示S.aureus的TRAP蛋白,并研究其免疫原性,为探索新型奶牛乳房炎S.aureus疫苗提供参考。本研究通过over-lap PCR方法融合了lpp’ompA和lpp’ompA-traP基因,并连入表达载体pQE30中,分别构成质粒pLO和pLO-TRAP。然后,转化到宿主菌XL1-Blue中,分别获得了XL1-Blue/pLO和XL1-Blue/pLO-TRAP菌株。诱导表达后,XL1-Blue/pLO-TRAP产生了预期大小的蛋白,经全菌体ELISA、流式细胞术检测和激光共聚焦扫描显微镜观察证明TRAP借助Lpp’Omp A成功地展示在大肠杆菌XL1-Blue表面。将重组大肠杆菌XL1-Blue/pLO、XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP蛋白用弗氏佐剂乳化后,分别免疫接种ICR小鼠,免疫后不同时间采取血清检测TRAP特异性抗体水平和抗体亚类;利用ELISPOT检测IL-4和IFN-γ、间接ELISA方法IL-17A;然后分别用S.aureus Newman和HLJ23-1菌株对免疫小鼠进行攻毒。结果,XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP均能够刺激产生高水平的TRAP特异性抗体;细胞因子检测TRAP组能产生良好的细胞和体液免疫,XL1-Blue/pLO-TRAP组也能产生良好的细胞和体液免疫。