口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus FMDV)主要引起牛、猪、羊等偶蹄动物的口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)。FMD是一种急性接触性传染病，发病率极高，并能形成大范围流行。疫苗免疫是目前以至将来防控口蹄疫的主要策略之一。随着分子生物学的发展以及对口蹄疫病毒基因组结构与功能的深入了解，核酸疫苗，尤其是最近出现的自杀式核酸疫苗已成为口蹄疫新型分子疫苗研发的主要方向。 首先从AsiaI口蹄疫病毒中提取总RNA，通过反转录聚合酶链式反应，用特异性的引物扩增获得目的基因P12A、3C，将其分别与pMD18-T载体连接，构建成重组克隆载体pMD-P12A、pMD-3C；再将pMD-P12A用EcoRI，XhoI酶切，回收P12A片断；再将pMD-3C用EcoRI，XhoI酶切回收；两者连接，转化JM109后获得重组质粒pMD-P12A3C；将此重组质粒用BamH、SmaI酶切回收P12A3C；自杀式真核表达载体pshame2α用BamH、SmaI酶切回收；两者连接，转化JM109后获得重组自杀式真核表达质粒pshame2α-P12A3C，重组质粒经酶切鉴定、PCR鉴定和测序鉴定，证明P12A3C片断以正确的方向插入表达载体的多克隆位点，成功构建了自杀式真核表达载体pshame2α-P12A3C。经间接荧光抗体检测和ElISA检测，此表达载体可在BHK-21细胞中表达出目的蛋白。 本试验将口蹄疫病毒P12A基因和3C基因同时插入含有甲病毒启动子的自杀式真核表达载体pshame2α，构建自杀式真核表达载体pshame2α-P12A3C，为口蹄疫自杀式核酸疫苗的研究奠定了基础。