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类风湿关节炎（RA）是一种自身免疫性疾病,目前尚无根治方法。该病严重影响着人类健康,同时动物RA使畜禽养殖业的效益下降。有研究表明,小干扰RNA（siRNA）能有效抑制目标基因表达,能有效治疗相关疾病。骨髓间充质干细胞（BMSCs）能靶向迁移受损组织,并且其多向分化潜能可以修复受损组织,与炎性细胞接触介导调节炎症,能有效治疗自身免疫性疾病。已有研究发现NF-κB信号通路与炎症和自身免疫疾病密切相关。本研究运用RA大鼠模型,探讨NF-κB信号通路在RA发病中的作用,研究RA发病机制。利用siRNA联合BMSCs体外移植,探讨基于NF-κB信号通路联合治疗RA的可行性。1.NF-KB信号通路在RA大鼠发病过程中动态变化的研究实验以鸡Ⅱ型胶原（CIA组）乳化液作为致敏剂于大鼠尾根部到背部散点皮下注射,建立RA大鼠模型。以大鼠生长状况、行为学、病理学、影像学、足趾肿胀、脾脏指数筛选成功RA大鼠模型;通过检测NF-κB信号通路中白介素-1β（IL-1βp）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、NF-κB-P65、p-NF-κB-P65的动态变化,探讨NF-κB信号通路在RA发病过程中的作用机制。结果显示,在1 w时CIA组血清中IL-1β、TNF-α表达量极显著高于对照组（P<0.01）。造模至2w时CIA组大鼠足趾肿值极显著高于对照组（P<0.01）。造模至3w时CIA组大鼠体重极显著低于对照组（P<0.01）、游泳不动时间极显著高于对照组（P<0.01）。造模至6 w时CIA组IL-1β、TNF-α、NF-κB-P65的mRNA表达量极显著高于对照组（P<0.01）;CIA组NF-κB-P65、p-NF-κB-P65蛋白表达量亦极显著高于对照组（P<0.01）;CIA组脾脏指数极显著高于对照组（P<0.01）;DR-X线成像显示CIA组出现骨质增生、骨赘等病变;切片显示关节软骨受炎性细胞浸润,导致软骨破坏、关节滑膜炎等。提示随着炎症发展,NF-κB信号通路被过度激活,其中IL-1β、TNF-α等因子之间相互作用加剧炎症反应。2.siRNA干扰IL-1β、TNF-α表达以及BMSCs对炎症细胞调节的体外研究由第一部分实验可见,RA大鼠IL-1β、TNF-α表达量增加,导致了 RA炎症加剧,提示通过抑制IL-1β、TNF-α表达可以作为治疗RA的一种手段。本研究以LPS刺激致炎细胞RAW264.7（单核巨噬细胞）建立体外细胞炎症模型,并通过siRNA技术干扰IL-1β、TNF-α表达,并采用BMSCs与炎性细胞共培养技术,检测其对炎症的调节作用,在体外探讨siRNA干扰联合BMSCs对RA治疗的可行性。结果显示,以500ng/ml的LPS刺激建立的炎症细胞模型,其培养上清液和细胞裂解液中IL-1β、TNF-α表达量均极显著高于正常处理组（P<0.01）;筛选实验,发现50 pmol siRNA和1 μ1的转染试剂比例组合为最佳转染组合,48 h为最佳转染时间;siRNA转染后,细胞培养上清液中siRNA+LPS+RAW264.7组的IL-1β表达量极显著低于LPS+RAW264.7 组（26.75±2.15 pg/ml vs 56.15±2.49 pg/ml,P<0.01）;siRNA+LPS+RAW264.7 组的 TNF-α 表达量极显著低于 LPS+RAW264.7 组（223.37±6.43 pg/ml vs 371.42±5.48pg/ml,P<0.01）。提示siRNA能有效抑制炎性细胞分泌IL-1β、TNF-α,能够抑制炎症细胞模型的炎症反应。划痕实验结果显示,LPS+RAW264.7+BMSCs组的划痕面积极显著小于LPS+RAW264.7（P<0.01）。提示BMSCs对炎症细胞具有良好的调节作用,并调节后者的增殖能力。3.基于NF-KB信号通路探讨siRNA联合BMSCs对RA治疗作用的实验研究siRNA联合BMSCs对RA大鼠进行体内治疗,以体重变化、足趾肿胀、行为学变化,血清中IL-1β、TNF-α表达,脾脏组织IL-1β、TNF-α、NF-κB-P65的mRNA表达量,踝关节、膝关节NF-κB-P65、p-NF-κB-P65蛋白表达量的变化,探讨基于NF-κB信号通路基因干扰联合BMSCs对RA治疗的作用及其机制。实验结果显示,甲氨蝶呤组、BMSCs组、siRNA组、siRNA+BMSCs组体重增长速度均高于,模型对照组,其中siRNA+BMSCs组的体重增长速度极显著高于模型对照组（P<0.01）。上述各治疗组的足趾肿胀值、脾脏指数、游泳不动时间、以及血清中IL-1β、TNF-α表达量均低于模型对照组,其中siRNA+BMSCs组上述指标均极显著低于模型对照组（P<0.01）。细胞标记实验显示关节成骨、软骨、以及滑膜中均发现有外源BMSCs,说明BMSCs能归巢至受损关节组织。除甲氨蝶呤组踝关节p-NF-κB-P65蛋白表达量与模型对照组差异不明显外,各治疗组膝关节、踝关节中NF-κB-P65、p-NF-κB-P65蛋白表达量均低于模型对照组,其中siRNA+BMSCs组上述指标极显著低于模型对照组（P<0.01）;各治疗组脾脏组织IL-1β、TNF-α、NF-κB-P65的mRNA表达量均低于模型对照组,其中siRNA+BMSCs组上述指标极显著低于模型对照组（P<0.01）。提示联合治疗能有效缓解RA发病和抑制NF-κB信号通路激活,并且BMSCs靶向修复受损组织,为后续基因干扰联合BMSCs治疗RA提供理论基础和实验依据。