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高致病性H5N1禽流感病毒自1997年在香港首次爆发并致死六人后,2003年底至今又在东南亚和中亚地区持续大规模爆发,除造成63人感染并死亡外,其造成的危害还严重打击了相关各国的农业经济,造成国民经济的惨重损失。世界卫生组织已向世界各国发出警告,指出H5N1病毒将最有可能成为下一次流感大流行的候选病毒株,并已开始组织世界各国参与到“大流感应对计划”中来。而当前全球流感应对计划的三大环节中最为薄弱的一环正是特异性快速诊断试剂的开发及生产。显然,开发出方便、快捷、实时的H5型流感病毒快速诊断试剂,对于尽早发现病毒并及时采取措施控制好H5N1在整个东南亚直至整个欧洲大陆流行,预防未来大流感的爆发或降低大流感爆发带来的危害都将具有重要的意义。所以本研究的目的就是建立一套符合当前需要的抗H5单抗盘,并应用于病毒的抗原性变异分析和满足不同场合需求的系列H5型流感病毒快速诊断试剂的建立。首先利用分子进化树分析手段分析认识了近年来东南亚各国流行的H5N1病毒株的HA1基因序列的进化规律,初步筛选出一株代表性病毒株――A/Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为抗H5型单抗盘制备的主要免疫原。该毒株包含有绝大多数H5N1病毒株HA上的主要抗原决定簇,经鸡胚大量繁殖培养并灭活后用作免疫和单抗筛选。同时还选用低毒力的活病毒株A/Dk/JX/6151/03(H5N3)用于增强免疫效果。其次,通过多抗制备证实上述病毒株在灭活后,其HA抗原性并未被完全破坏,仍然保持了较好的免疫原性。然后应用该灭活病毒采用三种形势的常规免疫法和两种方式的快速免疫法制备出24株抗H5型单抗腹水,初步形成一个能特异识别H5型流感病毒的单抗盘标准品。其中快速免疫法是一种高效的单抗制备方法,该方法在初免后第13天即可进行融合,