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以hTERT mRNA为靶点的反义核酸抗肿瘤候选药物癌泰得(序列为ACTCACTCAGGCCTCAGACT)在体内、外水平表现出良好的抗肿瘤活性。作为新药研发的候选化合物,其生产、体外活性评价和药代动力学研究是临床前研究必不可少的环节。本课题在以往研究的基础上,主要从事了以下三方面工作。 一、癌泰得生产和纯化规模的放大 以T-树脂作为合成载体,采用DMT-ON形式在(?)KTA oligopilotⅡ合成仪上合成癌泰得,最大合成规模可达2mmol;纯化时利用DMT的疏水性,在SOURCE15Q为填料的离子柱上预先用高盐缓冲液洗脱不带DMT基团的合成失败序列,接着用0.4%TFA在柱上切割,脱DMT保护后,使用盐浓度梯度分离硫代不完全片断和少量的(n-x)片断,从而获得纯品。结果显示,以290nm为监测波长,流速为382cm/h,载量为12mg/g填料的条件下,纯化产品终纯度可达98.23%,各项检测指标满足药用要求。 二、癌泰得体外抗肿瘤活性评价 采用MTS还原法评价了反义药物癌泰得体外抗肿瘤活性。试验中选择12株人源肿瘤细胞株,将培养至对数生长期的细胞接种于96孔细胞培养板,培养24小时后用脂质体转染不同浓度的癌泰得于细胞中,用药72小时后MTS试剂显色并计算癌泰得对肿瘤细胞增殖的抑制率。以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线,采用Logit法计算半数有效浓度(IC50)。对各株肿瘤细胞重复试验一次。结果显示,癌泰得对12株人肿瘤细胞在体外均有不同程度的增殖抑制作用,IC50值范围为0.0464μmol/L～0.550μmol/L。 三、小鼠静脉注射癌泰得后的组织分布研究 建立了用于测定组织样品中癌泰得的毛细管凝胶电泳法,并采用该法确定小鼠单次静脉注射癌泰得后的组织分布特点。研究选用Balb/c种雄性小鼠,尾静脉注射给药50mg/kg。分别于用药后0.25,0.5,1,2,3,4,8,24和48小时,放血、