第一部分COX-2基因单核苷酸多态性与肝细胞癌遗传易感性关系目的环氧化酶(Cyclooxygenase, COX)是花生四烯酸转变为前列腺素的关键酶,其亚型COX-2具有特殊的生物学特性,参与炎症反应、细胞凋亡抑制、肿瘤细胞侵入、转移和血管生成等生物过程,因此COX-2在肿瘤的发生发展中起重要作用。具有潜在生物学功能的COX-2基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP )位点可能影响COX-2基因的转录活性及表达水平从而影响蛋白质的功能。为此,本研究采取病例对照研究的方法,研究COX-2基因启动子区-1195G>A(rs689466)位点和3’端非编码区8473T>C(rs5275)位点单核苷酸多态性及基因-环境的交互作用与肝癌遗传易感性的关系。方法本研究的对象包括780例肝癌新发患者和780例非肿瘤患者,病例组患者为经组织病理学确诊,未经放射和抗癌药物治疗的新发病例;对照组选自同期访问的与病例组来自相同地区,并按照性别、年龄和民族与病例组频数匹配的非肿瘤患者。采用统一的调查问卷收集每个研究对象的一般人口学资料和相关危险因素暴露资料。采集研究对象外周静脉血3 mL,运用常规酚-氯仿法提取研究对象的基因组DNA,运用TaqMan MGB探针等位基因分型技术对COX-2基因-1195G>A和8473T>C两位点进行基因分型。单倍型分析和对照组Hardy-Weinberg遗传平衡定量检验采用Shesis (http://analysis.bio-x.cn/SHEsis Main.htm)软件。运用t检验和χ2检验分别进行计量资料和计数资料的统计分析,应用多因素非条件Logistic回归计算比值比(odds ratios, OR)及其95%可信区间(confidence intervals, CI)来评价各SNP位点基因型及其与环境因素的交互作用与肝癌发病风险的关系。数据分析采用SPSS13.0统计分析软件,所有统计检验均为双侧检验,检验水准α=0.05。结果⑴一般人口学资料及环境暴露因素分布病例组和对照组人群在年龄、性别、民族等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。吸烟、饮酒及慢性HBV感染的人数比例,病例组均明显高于对照组,两组分布差异有统计学意义(P<0.01)。⑵COX-2基因SNP与肝癌遗传易感性关系COX-2基因-1195G>A和8473T>C位点各基因型频率在对照组中的分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05)。在病例组和对照组之间,这两个SNP位点的基因型频率和等位基因频率的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素非条件Logistic回归分析显示,经调整年龄、性别、肿瘤家族史、吸烟、饮酒和HBV感染等因素后,与-1195G>A位点GG基因型相比,GA或者AA基因型与肝癌患病风险无统计学关联(校正OR = 1.30, 95%CI: 0.91-1.86, P = 0.147;校正OR = 1.35, 95%CI: 0.89-2.05, P = 0.152);与8473T>C位点TT基因型相比,TC或者CC基因型与肝癌患病风险无统计学关联(校正OR = 0.85, 95%CI: 0.62-1.16, P = 0.308;校正OR = 1.10, 95%CI: 0.51-2.38, P = 0.803)。对COX-2基因SNPs各基因型与肝癌发病的关系进一步进行年龄、性别、吸烟、饮酒、HBV感染等因素的分层分析,结果显示:与COX-2基因-1195G>A位点GG基因型比较,GA+AA基因型增加低年龄组(小于55岁)患肝癌的风险(校正OR = 1.56, 95%CI: 1.03-2.37, P = 0.037);而与8473T>C位点TT基因型比较,TC+CC基因型则降低女性患肝癌的风险(校正OR = 0.50, 95%CI: 0.25-0.99, P = 0.047)。进一步的交互作用分析发现COX-2基因8473T>C位点与性别交互作用有临界意义(校正OR = 0.48, 95%CI: 0.23-1.03, P = 0.060),但并未发现-1195G>A位点与年龄存在交互作用(校正OR = 1.58, 95%CI: 0.78-3.23, P = 0.207)。对吸烟、饮酒和HBV感染等其他因素进行的分层中并未发现COX-2基因SNPs与肝癌患病风险有关联。连锁不平衡(linkage disequilibrium, LD)分析结果显示, COX-2基因-1195G>A位点和8473T>C位点间r2值为0.192,不存在强连锁不平衡。对两位点的单倍型分析显示,3种常见的单倍型(频率>5%),即A-1195T8473、G-1195T8473、G-1195C8473,与肝癌患病风险无关联(OR = 0.97, 95%CI: 0.85-1.12, P = 0.716; OR = 1.05, 95%CI: 0.90-1.22, P = 0.537; OR = 0.98, 95%CI: 0.82-1.17, P = 0.785)。结论COX-2基因-1195G>A位点GA+AA基因型可能增加低年龄组(小于55岁)患肝癌的风险,8473T>C位点TC+CC基因型则可能降低女性患肝癌的风险。8473T>C位点与性别交互作用有临界意义,未发现-1195G>A位点与年龄存在相乘的交互作用。本研究结果尚需大样本量的研究进一步验证。目的环氧化酶(Cyclooxygenase,COX)是花生四烯酸转变为前列腺素的关键酶,其亚型COX-2具有特殊的生物学特性,在肿瘤的病因学研究中起着重要的作用。目前国内外关于COX-2基因-1195G>A和8473T>C位点单核苷酸多态性与肿瘤遗传易感性关系的研究很多,但结果不尽相同。本研究采用Meta分析方法,系统评价COX-2基因-1195G>A和8473T>C位点单核苷酸多态性与肿瘤遗传易感性的关系。方法以“COX-2”,“Cyclooxygenase 2”,“PTGS2”、“polymorphism”,“variants”、“Neoplasms”,“cancer”、“环氧化酶2”、“多态性”和“肿瘤”作为关键词,在Pubmed、EMBASE、Springerlink、PML、CNKI、维普和万方等中英文数据库检索相关文献。对所获文献进行质量评价、筛选和异质性检验、亚组分析、敏感性分析、发表偏倚评估等。要求入选文献均为非相关的病例对照研究,均以OR值为效应指标,基因型在对照人群中的分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。利用Review Manager5.0和Stata10.0软件进行Meta分析。结果⑴文献检索的基本情况COX-2基因-1195G>A位点多态性与肿瘤遗传易感性关系,30篇相关文献被最终选定,6篇中文和24篇英文,累计病例9973例,对照12917例;COX-2基因8473T>C位点多态性与肿瘤遗传易感性关系,34篇相关文献被最终选定,3篇中文和31篇英文,累计病例22859例,对照28136例。⑵COX-2基因多态性与肿瘤易感性关系COX-2基因-1195G>A位点单核苷酸多态性与肿瘤的患病风险相关(显性模型下合并OR = 1.13, 95%CI: 1.04-1.23;隐性模型下合并OR = 1.12, 95%CI: 1.03-1.23);8473T>C位点单核苷酸多态性与肿瘤的患病风险无关联(显性模型下合并OR = 0.99, 95%CI: 0.93-1.05;隐性模型下合并OR = 1.05, 95%CI: 0.96-1.15)。⑶亚组分析结果①按种族进行亚组分析结果显示,与COX-2基因-1195G>A位点GG基因型比较,携带GA或者AA基因型增加亚洲人肿瘤的患病风险(合并OR = 1.12, 95%CI: 1.01-1.23;合并OR = 1.35, 95%CI: 1.13-1.62);8473T>C位点多态性与亚洲人肿瘤患病风险无关联(显性模型下合并OR = 0.96, 95%CI: 0.88-1.04)。②按肿瘤类型进行亚组分析结果显示,COX-2基因-1195G>A位点多态性与肝癌患病风险无关联(显性模型下合并OR = 1.14, 95%CI: 0.95-1.36;隐性模型下合并OR = 1.20, 95%CI: 0.87-1.66);与8473T>C位点TT基因型比较,TC+CC基因型降低个体膀胱癌的患病风险(合并OR = 0.75, 95%CI: 0.63-0.90)。按肿瘤类型进行的亚组分析中并未发现COX-2基因SNPs与结直肠癌、食管癌、肺癌、前列腺癌和乳腺癌等肿瘤患病风险有关联。③按对照组研究对象来源和样本量进行亚组分析结果显示,在对照来源于普通人群的研究或样本量>500的研究中,COX-2基因-1195G>A位点AA基因型增加肿瘤的患病风险(对照来源于普通人群:合并OR = 1.26, 95%CI: 1.03-1.55;样本量500-1000:合并OR = 1.31, 95%CI: 1.11-1.56;样本量>1000:合并OR = 1.17, 95%CI: 1.02-1.34),但按对照来源和样本量进行亚组分析结果显示,8473T>C位点多态性与肿瘤患病风险无关联。④按匹配情况进行亚组分析结果显示,病例组和对照组一般人口学特征匹配的研究,COX-2基因-1195G>A位点多态性与肿瘤患病风险相关(显性模型下合并OR = 1.11, 95%CI: 1.01-1.21;隐性模型下合并OR = 1.11, 95%CI: 1.01-1.21),但病例组和对照组一般人口学特征不匹配或匹配情况未知的研究,COX-2基因-1195G>A位点多态性只在显性模型下与肿瘤患病风险相关(合并OR = 1.37, 95%CI: 1.06-1.76)。⑤按基因分型方法进行亚组分析结果显示,在以PCR-RFLP或TaqMan为基因分型方法的研究中,COX-2基因-1195G>A和8473T>C位点多态性均与肿瘤患病风险无关。受收集到资料的限制,本研究未能按年龄、性别、吸烟、饮酒等因素,对COX-2基因单核苷酸多态性与肿瘤易感性关系研究进行相应的亚组分析。结论COX-2基因-1195G>A位点单核苷酸多态性可能与肿瘤的患病风险相关,各研究间的异质性主要来源于种族的差异;COX-2基因8473T>C位点单核苷酸多态性与肿瘤遗传易感性关系的研究,亚组分析显示其可能与膀胱癌的患病风险相关,但是与肺癌、乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌等肿瘤的患病风险无关联,异质性主要来源于肿瘤类型和研究设计不同。