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糖尿病已成为当前威胁全球人类健康最重要的慢性非传染性疾病之一。2型糖尿病(Type 2 diabetesmellitus,T2DM)患者不仅存在糖代谢紊乱,还多伴有血脂异常。近年来,ω-3多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid,PUFA)对心血管疾病的保护效应成为医学及营养学界关注的热点。膳食中ω-3PUFA分为动物性来源和植物性来源。动物性来源以二十碳五烯酸(Eicosapentaenoicacid,EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexenoicacid,DHA)为代表。植物性来源以α-亚麻酸(Alpha-linolenic acid,ALA)为代表。目前对动物性来源ω-3 PUFA与T2DM发病风险及糖脂代谢的人群干预研究相对较多,但结果尚存争议,植物性来源ω-3PUFA的研究相对较少,需要深入开展不同来源ω-3 PUFA对T2DM合并血脂异常人群糖脂代谢影响的研究,并探讨其可能的作用机制。本研究采用动物性来源ω-3PUFA(鱼油)、植物性来源ω-3PUFA(紫苏油)、动植物性来源兼有的ω-3 PUFA(鱼油+亚麻油),对T2DM合并血脂异常人群进行为期6个月的干预,综合比较不同来源-3 PUFA对其糖脂代谢的影响。同时通过高脂饲料喂养C57BL/6小鼠和MyD88-/-小鼠构建胰岛素抵抗(Insulinresistance,IR)模型,分别研究动物性来源ω-3PUFA(鱼油)、植物性来源ω-3 PUFA(紫苏油)经TLR4/MyD88依赖性途径与TLR4/MyD88非依赖途径调控IR的机制。研究内容分为三个部分:第一部分不同来源ω-3 PUFA对T2DM合并血脂异常人群糖脂代谢的影响目的:探讨不同来源ω-3PUFA对T2DM合并血脂异常人群糖脂代谢的影响。方法:于2017年2月～2017年3月在江苏省宜兴市官林医院糖尿病专科门诊招募180例T2DM合并血脂异常患者,随机分为鱼油组、紫苏油组和鱼油+亚麻油组,每组60人,每日分别给予3g鱼油胶囊(含EPA 1.14g,DHA1.44g)、3g紫苏油胶囊(含ALA2.04g)和3g鱼油+亚麻油胶囊(含EPA0.63g,DHA0.36g,ALA0.84g),持续时间6个月。在基线、干预3个月、干预6个月时采集空腹血,使用MindrayBS-800全自动生化分析仪测定血糖、甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、载脂蛋白 A1(Apolipoprotein Al,Apo A1)、载脂蛋白 B(Apolipoprotein B,ApoB)、脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]、游离脂肪酸(Freefattyacid,FFA)、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐、尿酸、尿素氮、总蛋白、白蛋白和球蛋白,使用AudicomAC6601全自动糖化血红蛋白分析仪测定糖化血红蛋白(Glycated haemoglobin,HbAlc),使用Roche cobas e 602电化学发光分析仪测定C肽和胰岛素。结果:共有156人完成6个月的干预研究,其中鱼油组54人,紫苏油组52人,鱼油+亚麻油组50人。与基线相比,鱼油组、紫苏油组和鱼油+亚麻油组C肽、胰岛素、稳态模型评估胰岛素抵抗指数、TG、TC、非HDL-C、ApoA1均降低(P<0.05),鱼油组HDL-C升高(P<0.05),紫苏油组和鱼油+亚麻油组血糖、HbAlc、ApoB、Lp(a)均降低(P<0.05),负油+亚麻油组FFA降低(P<0.05)。与紫苏油组和鱼油+亚麻油组相比,鱼油组干预3个月TG下降较为明显(P<0.05),HDL-C升高接近有统计学差异(P=0.055)。结论:动物性来源ω-3PUFA、植物性来源ω-3 PUFA和动植物性来源兼有的ω-3 PUFA在改善T2DM合并血脂异常人群糖代谢方面的作用相似,动物性来源ω-3 PUFA降低T2DM合并血脂异常人群TG的作用优于植物性来源ω-3 PUFA和动植物性来源兼有的ω-3 PUFA。第二部分不同来源ω-3 PUFA经TLR4/MyD88依赖性途径调控IR的机制研究目的:探讨不同来源ω-3PUFA经TLR4/MyD88依赖性途径调控IR的机制。方法:将6周龄无特定病原体(Specifiedpathogensfree,SPF)级健康雄性C57BL/6小鼠适应性喂养1周后,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、鱼油组和紫苏油组,每组10只。正常对照组给予AIN-93M普通饲料喂养,模型对照组、鱼油组和紫苏油组给予D12451高脂饲料喂养。鱼油组和紫苏油组每日按0.5g/kg bw分别给予鱼油(每100g鱼油含EPA 38g、DHA 48g)和紫苏油(每l00g紫苏油含ALA 68g)灌胃,持续4周。实验结束时,小鼠禁食不禁水12h～14h,摘眼球取血后颈椎脱臼处死,分离附睾白色脂肪组织。使用BeckmanDxC800全自动生化分析仪测定血糖、TG、TC、HDL-C、LDL-C,使用Merck MilliporeMILLIPLEX(?)map kits测定胰岛素、单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemotacticprotein-l,MCP-1)、白细胞介素 6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子 α(Tumornecrosis factor-α,TNF-α)、瘦素和抵抗素。采用RT-PCR和Western Blot方法检测白色脂肪组织TLR4、MyD88、TRAF6、IKKβ、NF-κB p65、RIP1、IRF3的mRNA和蛋白表达水平,同时对白色脂肪组织进行苏木精-伊红染色。结果:与正常对照组相比,模型对照组血糖、胰岛素、TG、TC、HDL-C、LDL-C、非HDL-C、LDL-C/HDL-C、IL-6、TNF-α和瘦素均上升(P<0.05),而且 200 倍光镜下、25mm2 内白色脂肪细胞数减少(P<0.05),白色脂肪细胞间质炎细胞浸润程度加深。经鱼油和紫苏油干预后,血糖、胰岛素、TG、TC、HDL-C、LDL-C、非 HDL-C 和 IL-6 均下降(P<0.05),而且 200 倍光镜下、25mm2内白色脂肪细胞数增多(P<0.05),鱼油组LDL-C低于紫苏油组(P<0.05)。由RT-PCR结果与Western Blot结果可见,模型对照组较正常对照组TLR4、MyD88、TRAF6、IKKβ、NF-κBp65、RIP1、IRF3的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05),经鱼油和紫苏油干预后,TLR4、MyD88、TRAF6、IKKβ、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达均较模型对照组下降(P<0.05)。鱼油组MyD88、IKKβ相对mRNA和蛋白表达均低于紫苏汕组(P<0.05)。结论:动物性来源ω-3 PUFA和植物性来源ω-3 PUFA均可以改善高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠IR和血脂异常,其机制涉及TLR4/MyD88依赖性途径。第三部分不同来源ω-3 PUFA经TLR4/MyD88非依赖性途径调控IR的机制研究目的:探讨不同来源ω-3 PUFA经TLR4/MyD88非依赖性途径调控IR的机制。方法:将8周龄SPF级健康雄性MyD88-/-小鼠适应性喂养1周后,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、鱼油组和紫苏油组,每组6只。正常对照组给予AIN-93M普通饲料喂养,模型对照组、鱼油组和紫苏油组给予D12451高脂饲料喂养。鱼油组和紫苏油组每日按0.5g/kgbw分别给予鱼油(每100g鱼油含EPA 38g、DHA48g)和紫苏油(每100g紫苏汕含ALA68g)灌胃,持续4周。实验结束时,小鼠禁食不禁水12h～14h,摘眼球取血后颈椎脱臼处死,分离附睾白色脂肪组织。使用BeckmanDxC800全自动生化分析仪测定血糖、TG、TC、HDL-C、LDL-C,使用 Merck MilliporeMILLIPLEX(?)mapkits 测定胰岛素、MCP-1、IL-6、TNF-α、瘦素和抵抗素。采用RT-PCR和WesternBlot方法检测白色脂肪组织TLR4、RIP1、IRF3、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平,同时对白色脂肪组织进行苏木精-伊红染色。结果:与正常对照组相比,模型对照组血糖、胰岛素、TC、HDL-C、瘦素和抵抗素均上升(P<0.05)。模型对照组、鱼油组和紫苏油组血糖、胰岛素、TC、HDL-C、MCP-1、IL-6、TNF-α、瘦素和抵抗素无统计学差异。正常对照组、模型对照组、鱼油组和紫苏油组200倍光镜下、25mm2内白色脂肪细胞数无统计学差异。由RT-PCR结果与Western Blot结果可见,模型对照组较正常对照组TLR4、RIP1、IRF3、NF-κBp65的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05),经鱼油和紫苏油干预后,RIP1、IRF3、NF-κBp65的mRNA和蛋白表达均无明显变化。结论:动物性来源ω-3PUFA与植物性来源ω-3 PUFA均不能通过TLR4/MyD88非依赖性途径改善高脂饮食诱导的MyD88-/-小鼠IR和血脂异常。