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目的本研究以去卵巢大鼠为骨质疏松症模型,用补肾经典方剂—左归丸进行干预,采用骨密度检测、Micro CT、免疫组化法、ELISA等实验技术,从铁调素对铁过载调节作用的角度,部分揭示左归丸对骨质疏松症的治疗作用及其机理,并为阐明“肾主骨”的科学内涵提供进一步的实验依据。方法先将60只SPF级雌性SD大鼠按体重随机分为3组：空白对照组12只,假手术组12只,造模组36只。造模组大鼠用45mg/kg体重的戊巴比妥钠麻醉后,施以双侧卵巢切除(OVX)手术。假手术组大鼠只切除卵巢周围少许脂肪组织。术后3个月,再将造模组大鼠按体重随机分为3组：模型组(OVX组)、OVX+戊酸雌二醇组(E2组)、OVX+左归丸组(左归丸组),每组各12只。分组后开始对各给药组大鼠灌胃给药：左归丸组天鼠灌胃给予左归丸水煎液,给药浓度为0.968 g生药/mL,给药体积为1 mL/100g体重,给药剂量为9.68 g生药/kg体重；E2组大鼠灌胃给予戊酸雌二醇混 悬液,给药浓度为0.018 mg/mL,给药体积为1mL/100g体重,给药剂量为0.18 mg/kg体重。以上给药,一天一次,连续6天,休息1天后,再连续给药6天,如此给药3个月。空白对照组、假手术组和模型组大鼠按上法灌胃给予等体积的纯净水。灌胃期间,根据每周所称取的体重调整给药量。在末次给药1h后,将大鼠麻醉,腹主动脉取血,所取全血静置1h后,以3000 r/min离心20 min,取血清,分装后放在-80℃冰箱保存待测,用于外周血血清中铁蛋白(Ferritin)、铁调素(Hepcidin)、骨钙素(BGP)、Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b (TRACP-5b)含量的检测。然后,将大鼠迅速处死,取子宫并称重,测定子宫系数；取脊椎骨,用于骨密度(BMD)检测；取右侧股骨,福尔马林固定,Micro CT扫描,用于骨组织形态指标检测,包括骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)及结构模型指数(SMI)；取右侧胫骨,4%多聚甲醛(含1%oDEPC)固定,制作脱钙骨冰冻切片,用于骨髓中膜转铁蛋白1(Fpn1)蛋白表达的检测。实验结果皆以均数±标准差(x±s)表示,均采用SPSS20.0统计软件进行统计学处理。先进行正态性检验,正态分布数据两组以上的比较,采用单因素方差分析(ANOVA),组间两两比较,方差齐性的采用其项下的LSD检验；方差不齐的则采用其项下的Dunnett’s T3(3)检验；若数据为非正态分布时,采用非参数检验Kruskal-Wallis单因素ANOVA (k样本)(W),组间两两比较,采用其项下的Stepwise step-down检验。结果1左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠子宫系数的影响与假手术组相比,OVX组、E2组和左归丸组大鼠子宫系数皆明显降低；与OVX组相比,E2组大鼠子宫系数明显增高,而左归丸组与OVX组无差异。2左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠腰椎BMD的影响OVX组大鼠腰椎BMD较之假手术组显著降低；与OVX组相比,E2组和左归丸组天鼠腰椎BMD显著增高,但仍显著低于假手术组。3左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠股骨骨形态学指标的影响3.1左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠股骨BV/TV的影响与假手术组相比,OVX组大鼠股骨BV/TV显著降低；E2组和左归丸组大鼠BV/TV比OVX组明显增高,但仍显著低于假手术组。3.2左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠股骨Tb.N、Tb.Th及Tb.Sp的影响与假手术组相比,OVX组、E2组和左归丸组大鼠Tb.N明显降低,Tb.Sp则明显增高；与OVX组相比,E2组和左归丸组大鼠Tb.N均明显增高,Tb.Sp则明显降低。各组大鼠Tb.Th无明显差异。3.3左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠股骨SMI的影响与假手术组相比,OVX组大鼠SMI明显增高；E2组和左归丸组大鼠SMI与OVX组相比明显降低,但仍明显高于假手术组。4左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠外周血血清中Ferritin、Hepcidin、BGP、 COL Ⅰ及TRACP-5b含量的影响4.1左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠外周血血清中Ferritin、Hepcidin含量的影响与假手术组相比,OVX组大鼠外周血中Ferritin含量明显增高,Hepcidin含量则明显下降；与OVX组相比,E2组和左归丸组大鼠Ferritin含量均明显减少,Hepcidin含量则明显增高,但与假手术组相比仍有差异。4.2左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠外周血血清中BGP、COL I含量的影响与假手术组相比,OVX组大鼠外周血中BGP及COL I含量均明显增高；E2组和左归丸组大鼠BGP及COL I含量均明显低于OVX组,但左归丸组COL I含量仍明显高于假手术组。4.3左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠外周血血清中TRACP-5b含量的影响与假手术组相比,OVX组大鼠外周血中TRACP-5b含量明显增高；E2组、左归丸组大鼠TRACP-5b含量与OVX组相比明显降低。5左归丸对卵巢切除所致骨质疏松大鼠胫骨骨髓中Fpnl蛋白表达的影响OVX组大鼠胫骨骨髓中Fpnl蛋白表达IOD显著高于假手术组：与OVX组相比,E2、左归丸组Fpnl蛋白表达IOD显著降低；但左归丸组Fpnl蛋白表达IOD仍明显高于假手术组,E2组则与假手术组无差异。结论(1)切除大鼠卵巢可使骨微细结构破坏,骨密度降低,造成骨质疏松症；而左归丸可改善骨微细结构,提高骨密度,对卵巢切除所致的骨质疏松症产生治疗作用。(2)切除大鼠卵巢可使TRACP-5b以及BGP、COL I的水平增高,呈现出高转换的骨丢失状态；而左归丸对其具有一定的抑制作用,使骨吸收和骨形成趋于平衡,从而达到治疗骨质疏松症的作用。(3)切除大鼠卵巢可使Hepcidin水平降低,骨髓细胞上的Fpn1内陷降解因而被抑制,使铁离子过多转运至细胞外,导致铁过载,进而使破骨细胞活性增强；而左归丸能提高Hepcidin水平,改善卵巢切除所致的铁过载。这是其能够治疗骨质疏松症的机理之一。以上结果提示：铁调素对铁过载的调节作用在“肾主骨”中起着一定作用。