透骨草总生物碱对乳腺癌骨转移影响的实验研究

来源 :三峡大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:freeman110_wh
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目的:  提取、鉴定中草药“透骨草(tougucao,TGC)”中所含的生物碱成分,通过体内、外实验探讨透骨草总生物碱(the total alkaloids of tougucao,TTAT)对乳腺癌骨转移的影响及其机制研究。  方法:  (1)采用生物碱提取法提取透骨草中所含的生物碱,并通过显色反应、高效液相仪进行测定;  (2)采用MTT实验法检测TTAT对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响;  (3)采用细胞划痕和Transwell实验检测TTAT对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的影响;  (4)采用蛋白质印迹(Western Bloting,WB)法检测TTAT对人乳腺癌MDA-MB-231中RANKL表达的影响;  (5)采用称重法、测量法观察TTAT对乳腺癌胫骨骨转移裸鼠肿瘤生长的影响;  (6)采用影像学技术观察和评估TTAT对乳腺癌胫骨骨转移裸鼠溶骨性病变的影响;  (7)采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)法和抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrate resistant acid phosphatase staining,TRAP)法观察TTAT对乳腺癌胫骨骨转移裸鼠肿瘤组织及骨组织形态变化的影响;  (8)采用WB法检测TTAT对乳腺癌胫骨骨转移裸鼠肿瘤组织中RANKL/OPG比值以及p-ERK、ERK、p-JNK、JNK表达的影响。  结果:  (1)从500 g透骨草中提取得到3.28 g提取物,生物碱显色试剂呈现阳性结果,高效液相仪检测证实其中含有生物碱成分;  (2)MTT结果显示TTAT能够显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖;  (3)细胞划痕和Transwell实验结果显示TTAT能够显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力;  (4)WB实验结果显示TTAT能够显著下调人乳腺癌MDA-MB-231细胞中RANKL的表达量;  (5)肿瘤测量和称重结果显示TTAT能够显著抑制乳腺癌胫骨骨转移裸鼠肿瘤的生长,与模型组(5.07±0.30)g比较,TTAT组(3.87±0.65)g瘤重明显下降(p<0.01);  (6)影像学结果发现TTAT能够显著抑制乳腺癌胫骨骨转移裸鼠的溶骨性病变,通过两组影像学评分显示,观察者一:模型组(4.00±1.28)分,TTAT组(3.10±1.01)分,二者差异具有统计学意义(p<0.01);观察者二:模型组(3.38±1.08)分,TTAT组(2.91±1.21)分,二者差异具有统计学意义(p<0.01);  (7)HE染色结果显示TTAT能够显著抑制肿瘤癌巢形成,使核分裂像减少,并对乳腺癌胫骨骨转移裸鼠病变骨质具有保护作用;TRAP染色结果显示TTAT能够显著抑制乳腺癌胫骨骨转移裸鼠病变骨质中破骨细胞的分化、成熟,与模型组(22.33±2.52)比较,TTAT(10.33±1.52)组中破骨细胞数量明显减少,差异具有统计学意义(p<0.05);  (8)TTAT能够显著降低乳腺癌胫骨骨转移裸鼠肿瘤组织中RANKL/OPG比值,同时下调p-ERK、p-JNK的表达。  结论:  1、中草药透骨草中含有生物碱成分,并成功提取透骨草总生物碱;  2、TTAT能够显著抑制人高转移三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力,并能够下调细胞中 RANKL蛋白的表达;  3、乳腺癌MDA-MB-231细胞成功构建裸鼠胫骨骨转移模型,并能够使其发生溶骨性病变,TTAT干预后能够明显抑制肿瘤的生长和溶骨性破坏;  4、TTAT抑制乳腺癌骨转移裸鼠骨转移可能是通过上调破骨细胞相关因子OPG/RANKL的比值,进而抑制其相关蛋白ERK和JNK的磷酸化而发挥作用。
其他文献
目的构建携带绿色荧光蛋白的TNFa-Tumstatin融合基因腺病毒表达载体(AdGFP/TNFa-Tumstatin),转染人脐带间质干细胞(humanumbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs),研