拉曼散射（Raman Scattering）是由入射光照射到介质表面，与介质中的分子产生相互作用，光波的频率在被分子散射后发生改变的一种特殊效应。散射光与入射光之间的频率变化值由分子本身决定，每种分子都会使光波产生不同的频率变化。因此，由不同分子组成的物质都有它各自的拉曼光谱，也由于这个原因，拉曼光谱被称为“指纹谱”。拉曼光谱可以为我们提供分子结构、分子内部键振动等信息，被广泛应用于科研工作中。但拉曼散射技术也有其自身的局限性，物质分子极小的拉曼散射截面（一般为10-25～10-30cm2·sr-1）致使其散射强度微弱，在实际的检测中很多时候不能满足测试需求，尤其是在检测微痕量物质方面。　　表面增强拉曼散射（Surface Enhanced Raman Scattering，SERS）技术主要是由粗糙金属表面的自由电子在激光的激发下产生共振，使电场强度增强，进而使得吸附在金属表面的分子的拉曼信号强度增大。SERS光谱技术具有多方面优势，如响应速度快、信号灵敏度高、无损检测等，同时还克服了常规拉曼光谱信号强度低的缺点，能够用于检测微痕量待测物质，被普遍应用于化学、生物、医学等诸多领域。随着近些年来纳米制备技术的突飞猛进，性能优良的SERS基底制备也取得了很大进步。由于贵金属材料不易发生带间跃迁，如果选择合适的激发波长，就可以避免带间跃迁的发生从而防止入射光子的能量转化为热能，可以实现高效的表面等离子体共振，因此，SERS基底制备主要采用金、银、铜等贵金属材料体系。　　本文采用电化学方法腐蚀纯金膜，制备出多孔金SERS基底。在电化学反应中，可以通过控制相关反应条件实现对SERS基底形貌的精确调控，主要控制参量为反应温度、扫描周期和扫描速率。随后，基于制备出的一系列不同孔径的SERS基底的微结构和物性表征，筛选出SERS性能最优的多孔金基底。致密均匀的多孔金基底中孔与孔之间相互交联，形成多通道结构，提供了丰富的SERS“热点”。基于此基底，本文对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）进行了系统检测，采用酶法实现了间接检测NADH，并达到了快速、定量、痕量检测的目的。本论文的具体内容总结如下:　　一、多孔金基底的制备、结构表征及性能优化。首先，在盖玻片表面沉积厚约100 nm的贵金属金层（盖玻片起支撑作用），从而得到平整光滑的金膜。采用电化学循环伏安法，结合三电极体系，将金膜作为工作电极。在循环制备过程中，电解液中的锌原子不断的在金电极表面沉积或脱离，发生合金-脱合金反应，反复此过程使金膜表面逐渐粗糙化，形成多孔金结构。通过控制反应温度、扫描周期、扫描速率三个主要实验参数，完成对基底微纳结构的优化。结果显示，当温度高于50℃时，金电极表面才开始出现多孔形貌，并且随着扫描周期和扫描速率的增加，孔尺寸逐渐变大。为了选取SERS性能最优的基底，对不同条件下制得的基底均进行了SERS增强性与重现性表征。在拉曼增强性表征实验中，利用一系列多孔金基底对浓度为10-2～10-9 M的罗丹明6G(R6G)溶液进行SERS测试。通过对比发现，在反应温度为50℃、扫描周期为20圈、扫描速率为5 mV/s条件下制备得到的SERS基底检测限可以达到10-7M。而且在基底重现性测试实验中，也是在此条件下制得的基底性能最优。因此，此实验条件为制备多孔金SERS基底的最佳条件，在后续实验中利用该条件下制得的拉曼活性基底进行SERS测试。　　二、基于多孔金基底建立一种新颖的NADH检测方法——间接法。NADH是细胞代谢中一种必不可少的重要分子，其含量多少将直接影响活体细胞的代谢功能。因此，如何实现对NADH的快速、定量、痕量检测在生物、医学等方面具有重要意义。本课题首先利用金/银基底等对NADH进行检测，基于SERS光谱分析发现NADH在基底表面极不稳定，且产生了新的反应过程，致使其性质发生变化，严重影响了对其浓度的测量，难以实现定量检测。进而，我们寻找出一种间接法实现对NADH的检测，具体是在第一步反应中促使NADH发生氧化生成H2O2，第二步反应中利用H2O2将色原氧化成色素，通过检测色素的SERS光谱来间接检测NADH。实验中，对8种常用色原进行了筛选，色原邻联甲苯胺(OT)因其优越的性质而被选定作为后续所用色原。OT对应的色素OT diimine具有可以与色原OT区分开的明显的拉曼特征峰，且检测限可以达到实际应用的水平。随后，通过实验上对OT浓度的优化，当浓度为2×10-3M时，OTdiimine的1448 cm-1特征峰积分强度(S1448)与H2O2浓度(C(H2O2))的对数线性关系范围为10-3～10-6M，线性范围最广。通过采用此浓度的OT建立起了lgS1448与lgC(H2O2)之间的线性关系并得到线性方程。最后，利用两组不同浓度的NADH进行实验，对线性关系进行了验证，结果显示两组实验对数误差均小于3％，表明线性关系精确度高，可用于实际过程中对NADH浓度的快速、定量、痕量检测。