目的前期发现Mex3c具有强烈的负能量平衡作用,本实验通过构建Mex3c基因缺陷小鼠来探究其是否通过诱导下丘脑c-fos的表达参与机体能量平衡的调控,并且观察Mex3c子代小鼠胚胎神经管发育是否存在缺陷,为后期探究Mex3c在神经管发生过程的作用研究提供理论依据。方法1:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对性设计Mex3c基因1-2外显子sgRNA,将小鼠mex3c基因的gRNA和Cas9 mRNA共注射到受精卵中,产生目标基因敲除后代,待小鼠出生3周后剪鼠尾提取DNA并进行PCR鉴定,所获F0代杂合小鼠继续与正常小鼠合笼繁殖获取F1、2代小鼠,剪取组织提取DNA鉴定分离杂合体小鼠。2:选取8周龄正常、Mex3c^-/+小鼠各30只,各组随机均分为正常对照组(生理盐水1μL·g^-1体重、N=10)、正常瘦素组(瘦素5μg·g^-1体重、N=10)、正常饥饿激素组(饥饿激素1μg·g^-1体重、N=10)、Mex3c^-/+对照组、Mex3c^-/+瘦素组、Mex3c^-/+饥饿激素组,Mex3c^-/+各组小鼠注射干预及数量同正常组小鼠一样,均采取腹腔注射。H&E染色和尼式染色观察下丘脑神经细胞形态,免疫组织化学染色分析下丘脑神经核团c-fos蛋白的表达量。3:正常雌性小鼠和mex3c^-/+雌性小鼠喂养普通饲料（各组10只小鼠）,10只正常雌性小鼠喂养高糖高脂饲料。每组小鼠从8周龄开始,连续喂养12周,然后与正常雄性小鼠交配,每组中获得E14.5天胚胎。H&E染色观察神经管形态、LFB染色观察神经管髓鞘、TEM用于观察神经元超微结构,免疫组织化学技术用于分析nestin的表达。结果1:成功构建基因可以稳定遗传的Mex3c基因缺陷小鼠。2:H&E和尼氏体染色结果显示:正常小鼠和Mex3c^-/+小鼠病理学染色未见明显差异。免疫组化结果示:正常对照组小鼠下丘脑各神经核团中c-fos蛋白表达量较低,在注射瘦素和饥饿激素2h后c-fos的表达量均显著增加（^*P<0.05）;Mex3c^-/+对照小鼠相比正常对照小鼠,c-fos为高表达（^*P<0.05）,且与正常瘦素组小鼠相比无差异（P>0.05）;给于Mex3c^-/+小鼠饥饿激素干预后,c-fos的表达量明显下调,与正常对照组表达量基本一致,正常瘦素和饥饿激素组与Mex3c^-/+对照组和瘦素组之间c-fos表达量无明显差异。3:在神经管病理学研究中,每组胚胎在E14.5天的H&E切片中未发现明显差异,髓鞘染色中能够看到正常组明显蓝色更深一些,考虑由于由于髓鞘发育程度低所致显色条件要求更高的结果。在TEM下,HD和Mex3c^-/+组与正常组相比,线粒体水肿,大量空泡,线粒体嵴断裂,结构明显异常;突触前膜和突触后膜清晰,但突触间隙消失,突触有一定程度的融合,典型结构难以找到。Nestin结果显示正常组中的表达较低,HD和Mex3c^-/+组之间的差异很小。结论:Mex3c通过诱导下丘脑c-fos的表达升高进而参与了体内能量调控的过程。此外,能量代谢的失调使得雌性小鼠胚胎神经管在正常发育中成熟度异于正常小鼠。