拟南芥HARDY基因的克隆及其在番茄中的表达

来源 :石河子大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:yap1711
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非生物胁迫如干旱、盐碱和低温是限制作物产量和品质的最重要因素,培育抗逆性强的作物新品种对于提高农业生产力和节约资源具有重要的意义。转基因育种是提高作物抗逆性的一条有效途径。一些转录因子在植物对逆境的反应中起着重要的调节作用,由于一个转录因子能够调控着多个与抗逆相关的基因表达,因此,在作物抗逆育种中,通过遗传转化一个转录因子基因能够综合提高作物的抗逆性AP2/EREBP是植物所特有的一类转录因子,许多该家族成员在植物抗逆反应过程中起重要作用。其中HRD转录因子是新发现的植物在干旱胁迫应答过程中产生的调节性蛋白,是AP2/ERF-like亚家族的转录因子的一员,能够在干旱条件下提高植物对水分利用效率。由于HRD基因没有内含子,本研究直接通过PCR的方法从拟南芥基因组中克隆出HRD基因,经序列测定正确后。以强表达载体pBIN438为骨架,通过酶切、连接得到携带有HRD基因的植物表达载体pBIN-HRD,转化根癌农杆菌。将含有植物表达载体pBIN-HRD的根癌农杆菌GV3101菌株对番茄侵染,经过共培养、诱导不定芽、生根移栽后获得转HRD基因的再生苗。对再生植株进行目的基因的PCR和RT-PCR检测,结果初步表明拟南芥的HRD基因已经整合到番茄的基因组之中并在部分植株中得到了表达。对阳性转基因番茄进行叶绿素含量分析、叶片保水试验以及PEG诱导的抗旱性分析,结果表明HRD基因在一定程度上能提高番茄的抗旱性。同时本实验还对烟草进行了转化,得到了转基因再生烟草植株。本研究从拟南芥中克隆了HRD基因,采用农杆菌介导法将HRD基因转入番茄,并分析了转基因番茄植株的抗逆性,这对于作物的抗逆育种研究有较大的意义。
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