目前乳腺癌俨然已成为最威胁女性生命健康的恶性肿瘤,且乳腺癌的发病率呈现上升的趋势,乳腺癌的侵袭与转移常常也导致病人的不良预后以及存活率低下的原因。现已有研究称DRP1在乳腺癌中高表达,DRP1的异常高表达也与乳腺癌的不良预后有一定关联。DRP1作为一种线粒体分裂蛋白,在的线粒体分裂及过氧化物酶体分裂中都被证明发挥重要作用;BMAL1作为生物钟核心转录因子,对糖脂代谢及细胞存活至关重要。生物钟的紊乱将影响胞内蛋白异常表达进而引起疾病的发生。有文献表明线粒体分裂增加会促进肿瘤细胞的发生发展,但是DRP1在乳腺癌的发生发展中的具体作用机制尚不完全清楚,因此本文主要探究DRP1通过反馈影响生物钟蛋白BMAL1的表达进一步调控乳腺癌的发生发展的机制。1.我们对几种乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D、ZR-75-30、MDA-MB-231)中BMAL1和DRP1的内源蛋白水平进行检测,发现二者的表达呈明显正相关,并且二者均在高侵袭性的细胞系中高表达;通过细胞侵袭和增殖实验,证明DRP1可以促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,并且也能促进乳腺癌细胞的增殖。2.在ZR-75-30细胞系中外源过表达DRP1检测对细胞内源BMAL1的影响,通过实时定量PCR实验和免疫印迹法,证明DRP1在转录和蛋白水平上调BMAL1的表达;通过荧光素酶报告基因实验,证明DRP1上调BMAL1-Luc的表达。在过表达DRP1的ZR-75-30细胞系中进一步检测节律相关蛋白CLOCK及下游靶蛋白CRY1/2及PER1/2的表达,发现DRP1在转录及蛋白水平均上调节律相关蛋白的表达。3.在ZR-75-30细胞系中外源过表达DRP1的同时干涉BMAL1表达,检测对乳腺癌细胞增殖水平以及侵袭能力的影响,证明BMAL1在DRP1促进乳腺癌细胞的发生发展过程中不可或缺。4.最后在ZR-75-30细胞系中外源过表达DRP1的同时干涉BMAL1,发现糖酵解通路中HK2、PFK1及LDAH1的蛋白水平被显著上调。并通过葡萄糖检测试剂盒、ATP检测试剂盒,证明线粒体分裂蛋白DRP1通过激活BMAL1上调了乳腺癌的糖代谢能力,促进乳腺癌发生发展。本实验证明线粒体分裂蛋白DRP1能够促进乳腺癌的增殖和侵袭,主要通过上调了BMAL1的转录及蛋白水平,激活糖代谢关键蛋白HK2的表达,并上调糖酵解代谢能力,进一步促进乳腺癌的增殖与侵袭。这些研究将线粒体分裂与生物节律联系起来,为乳腺癌的发生发展提供了进一步的理论支持。