西洋参多糖提取纯化及其胶囊制备

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西洋参中含有丰富的多糖,西洋参多糖具有广泛的生物活性,如抗疲劳、免疫调节、抗肿瘤、防辐射和降血糖等。本文以西洋参为原料,研究了西洋参多糖的提取、分离纯化、初步结构及胶囊剂制备,以期为西洋参多糖的研究和开发奠定理论基础。主要结论如下:采用水提醇沉和酶-水提取法进行西洋参多糖的提取,二者比较,确定出较佳的提取方法。首先在单因素基础上,应用正交实验分析方法对西洋参多糖的水提醇沉法进行优化,最佳工艺条件是:浸提温度100℃、浸提时间2h,料液比1:25,提取次数为2次,加乙醇至醇浓度为80%,此条件下西洋参粗多糖提取率为21.25%。其次,在单因素基础上,应用响应面分析方法对西洋参多糖的酶-水提取法进行优化,最佳工艺条件是:酶解时间1.2h、酶解温度60.22。C、pH=6.51、复合酶添加量2.02%(纤维素酶与木瓜蛋白酶用量的比例是1:4),此条件下得到的西洋参粗多糖提取率为27.43%,二者相较,酶-水提取法提取率提高了6.18%。通过6种方法去除粗多糖中的蛋白:sevag法、三氯乙酸(TCA)法、盐酸法、木瓜蛋白酶法、酶-Sevag法、酶-TCA法,并对六种脱蛋白效果进行了比较,对筛选出的脱蛋白方法在单因素考察基础上做响应面实验,最佳的脱蛋白方法为酶-Sevag法,最佳工艺条件是:酶添加量1.62%,反应温度59.93℃,反应时间1.13h,体系pH为6.5,sevag处理3次,蛋白脱除率为93.72%,多糖保留率为76.79%。酶-Sevag法脱蛋白相较于其他五种方法,蛋白脱除率提高了11.83%-36.38%。通过4种方法研究西洋参多糖的脱色工艺:粉末活性炭法、D4020大孔树脂静态脱色法、双氧水(H202)法、反胶束法脱色,并对四种脱色效果比较,筛选最佳的脱色的方法。对筛选出的脱色方法在单因素考察基础上做正交实验,最佳脱色方法为粉末活性炭脱色法,最佳工艺条件是:加碳量为1.5%,水浴温度为45℃,水浴时间为30min,色素脱除率为97.41%,多糖保留率为77.83%。粉末活性炭脱色法相较于其他三种方法,色素脱除率提高了7.11%-15.86%。经过DEAE-Cellulose 52离子交换柱层析分离,以0-0.5mol/L NaCl溶液线性洗脱,得到三种多糖,三种组分分别经过SepharoseCL-6B凝胶柱层析进一步分离纯化,均只得到单一峰,分别命名为A-I、B1-Ⅱ、B2-Ⅲ。经过紫外光谱检测,初步推测西洋参多糖的三个组分均不含蛋白质与核酸;经过红外吸收光谱法分析检测,结果表明个多糖组分均具有多糖的特征吸收峰,均具有吡喃糖环的吸收峰和C=O的伸缩振动;对三种多糖进行高效凝胶过滤色谱分析检测,三者均为均一组分:A-Ⅰ的重均分子量Mw为1.54x105,B1-Ⅱ的重均分子量Mw为1.74×107,B2-Ⅲ的重均分子量Mw为9.69×106;单糖组成分析结果表明,西洋参多糖A-Ⅰ由葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成;西洋参多糖B1-Ⅱ由葡萄糖、半乳糖和鼠李糖组成;西洋参多糖B2-Ⅲ由半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成。制粒过程中添加糊精为辅料。通过正交实验优化制粒工艺,得到最优制粒工艺为:辅料用量为15%,润湿剂为80%乙醇,用量为20%(20mL/100g药粉),该工艺下颗粒平均成型率为96.16%。将制得的湿颗粒,50℃干燥,整粒,填充0号胶囊壳即得硬胶囊。为防止颗粒吸潮而导致变质,在粉碎、过筛、分装及贮存时,环境湿度应该控制在65%以下。
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