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目的越来越多的研究表明,microRNA(miRNA)在心力衰竭的治疗中起关键作用。有研究显示microRNA-874(miR-874)抑制剂能够减轻H2O2诱导的心肌细胞坏死,可能在心肌细胞坏死的方面对心力衰竭有治疗作用。前期报道表明miR-874抑制剂很可能对心血管疾病有治疗作用,但是很多新药由于没有对其可能的副作用进行深入研究,仓促投入临床及生产,导致了大量人力和物力的巨大浪费,以及生命和财产的重大损失,新药投入市场后被迫撤回、停止投产。更多的药物在三期临床实验阶段就由于前期基础实验不够充分,而不得不停止临床实验。心衰是心肌细胞进行性丧失的结果,心肌细胞是终末分化细胞,心脏成熟后心肌细胞就不再分裂增殖,因此心肌细胞一旦缺失很难得到补充,会使心脏出现病理性损伤导致心力衰竭。心肌成纤维细胞也是构成心脏的细胞之一,它能够分泌过多的细胞外基质,细胞外基质过度沉积形成瘢痕组织,引起心肌纤维化导致心衰。本研究通过检测原代心肌细胞中caspase-8的活性、原代心肌成纤维细胞的数目和其中caspase-3/7的活性、H9C2心肌细胞分泌的MMP2和MMP9的mRNA水平及其活性、H9C2细胞中SERCA2a的mRNA水平及原代心肌细胞中钙浓度等实验来全面研究miR-874抑制剂的作用,探讨其治疗心力衰竭的潜能。方法心力衰竭以心肌细胞的丧失和心肌纤维化为主要特征,所以本实验以心肌细胞和导致纤维化的心肌成纤维细胞为主要研究对象。首先用转染试剂RNAiMax将100 nM miR-874抑制剂或阴性对照转进细胞。本研究使用实时荧光定量PCR检测H9C2细胞中miR-874的水平,SERCA2a、MMP2和MMP9的mRNA水平;使用明胶酶谱法检测H9C2细胞分泌的MMP2和MMP9的活性;使用CellTiter-Fluor TM Cell Viability Assay检测原代心肌成纤维细胞的增殖和Caspase-Glo(?)Assay(包括Caspase-Glo(?)8 Assay检测原代心肌成纤维细胞凋亡和Caspase-Glo(?)3/7 Assay检测原代心肌细胞凋亡)检测细胞凋亡;使用Fluo-4NWCalciumAssayKits检测原代心肌细胞中Ca2+的浓度。结果miR-874抑制剂组的H9C2细胞中的miR-874水平明显低于对照组(P<0.01);转染实验成功的敲降了 miR-874抑制剂组H9C2细胞中的miR-874水平,接下来的实验均是在此基础上进行的。miR-874抑制剂对原代心肌成纤维细胞的增殖没有影响(P>0.05);与对照组相比,miR-874抑制剂组的原代心肌成纤维细胞中Caspase-8活性明显降低(P<0.01);miR-874抑制剂组的原代心肌细胞中Caspase-3/7活性明显升高(P<0.01);在miR-874抑制剂组和对照组之间,H9C2细胞中SERCA2amRNA水平的变化没有显著差异(P>0.05);同时miR-874抑制剂组的原代心肌细胞中Ca2+浓度与对照组没有差异(P>0.05)。与对照组相比,miR-874抑制剂组的H9C2细胞分泌MMP9的mRNA水平明显降低(P<0.05),而MMP2的mRNA水平没有明显改变(P>0.05);同时明胶酶谱图的结果显示MMP9和MMP2活性的变化与其mRNA水平的改变一致。结论1.miR-874抑制剂虽然对原代心肌成纤维细胞的增殖没有影响,但是miR-874抑制剂能够降低原代心肌成纤维细胞中Caspase-8的活性,可能抑制原代心肌成纤维细胞凋亡。miR-874抑制剂可能促进心肌纤维化,导致心肌负性重构。2.miR-874抑制剂能够增强原代心肌细胞中Caspase-3/7的活性,可能促进原代心肌细胞凋亡。3.miR-874抑制剂能够下调H9C2细胞分泌的MMP9 mRNA水平及活性,而对MMP2没有影响,miR-874抑制剂可能缓解心肌纤维化,对心力衰竭起治疗作用。4.miR-874抑制剂对H9C2细胞中SERCA2a的mRNA水平没有影响,同时对原代心肌细胞中的Ca2+浓度也没有影响。表明miR-874抑制剂可能没有通过SERCA2a和Ca2+的途径对心肌收缩功能产生影响。5.综合来看miR-874抑制剂对心衰治疗的作用有利也有弊,因此我们需要对miR-874抑制剂与心衰的关系进行深入研究,本研究的成果将为未来心衰治疗药物的开发提供依据。近年来发现几个miRNAs的组合对于治疗心肌梗死、诱导心肌成纤维细胞向心肌细胞转化起到很好的效果,鉴于miR-874抑制剂在治疗心肌梗死其它方面的积极作用,我们可以考虑利用miR-874抑制剂与其它促进心肌细胞增殖的miRNAs 一起联合,采取鸡尾酒疗法治疗心血管疾病。