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多环芳烃是环境中常见的污染物,被污染过的土壤中含有多种类型的多环芳烃,这些多环芳烃会通过食物链的富集而危害人类健康。睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)可以多环芳烃为唯一的碳源和能源将其降解。为达到修复环境的目的,本文对基因重组的睾丸酮丛毛单胞菌工程菌降解萘、菲等多环芳烃模式化合物的能力进行研究,以期为Comamonas testosteroni工程菌用于现实环境中修复多环芳烃污染,改善当地生态环境,并最终达到降低或消除污染的目的提供参考。紫外分光光度法测定含有萘、菲的MS液体无机盐培养基中萘、菲吸光度的变化,通过萘、菲浓度标准曲线公式确定萘、菲的浓度从而定量分析C. testosteroni工程菌降解萘、菲的能力。将其与C. testosteroni野生菌的降解能力作比较,结果表明工程菌具备高效降解萘、菲的能力。将C. testosteroni工程菌接种于含有2mmol/L菲的MS培养基中培养拟南芥,根据拟南芥生长状况以及其体内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化,分析了C. testosteroni工程菌对拟南芥菲胁迫响应的影响并与C. testosteroni野生菌相比较,结果显示工程菌可以一定程度上降低菲对拟南芥机体的毒害,并且比野生菌作用效果更显著,具备一定的用于实际环境污染修复的能力。对C. testosteroni中的关键酶3α-羟类固醇脱氢酶/碳酰基还原酶(3α-HSD/CR)的基因(3α-HSD/CR)进行PCR扩增,将该基因片段克隆到原核表达载体pPROEXHTb上,构建重组表达质粒ppPROEXHTb-3a。在大肠杆菌原核表达体系中,经IPTG诱导,表达了重组蛋白3α-HSD/CR。将重组蛋白与不完全弗氏佐剂混合,制备成免疫原,对家兔进行三次免疫后获得多克隆抗体。用该多克隆抗体对3α-HSD/CR基因的表达情况进行ELISA检测,结果显示,工程菌的3α-HSD/CR基因在无胆固醇诱导的情况下即可大量表达,其表达量显著高于野生菌3a-HSD/CR基因的表达量,这一优势使得工程菌在修复多环芳烃污染方面可能具有更高的应用价值。