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microRNAs(miRNAs)是一类长度为21～25个核苷酸的内源性非编码的小RNA,其在生物体的发育过程中具有多种重要的调控作用。它可通过碱基互补配对的方式与靶基因的mRNA3’非翻译区(3’UTR)相结合,导致靶mRNA降解或翻译抑制,从而使基因沉默。miR-184是一种广泛存在于果蝇、小鼠、人等多种生物中的miRNA,在不同物种中具有高度的保守性。我们以果蝇作为模式生物,研究miR-184的功能。
本实验室的前期研究结果显示果蝇体内miR-184的表达呈现时间特异性和组织特异性。伴随着果蝇的发育miR-184的表达呈现逐渐升高趋势,在胚胎发育的中后期、三龄幼虫时,miR-184的表达量达到了高峰；同时胚胎的原位杂交结果显示miR-184在中枢神经系统高表达。基于这些结果,我们想研究miR-184在果蝇神经系统中的功能。
首先,我们构建了UAS-GFP-mir-184过表达的果蝇,用不同组织的Gal4驱动其表达,结果显示在miR-184全身过表达时,果蝇会出现致死的表型。
其次,我们对mir-184突变体果蝇进行了分析,mir-184突变体果蝇是可育的,但是mir-184突变体果蝇寿命相比于野生型变短,并且存在运动能力的下降。另外,我们运用免疫荧光染色技术对mir-184突变体果蝇的胚胎和三龄幼虫进行了分析,结果显示在mir-184突变体果蝇中,神经肌肉接头(NMJ4)上突触囊泡(bouton)的数量与野生型相比减少,而NMJ4突触的面积(area)增加,会出现卫星囊泡(mini-bouton)。这些表型能够被elav-Ga14驱动的miR-184的过表达所挽救。这表明miR-184可能和突触的发育有关。
最后,我们实验室前期结果显示CG10217是miR-184的一个潜在的靶标。因此我们制备了CG10217的多克隆抗体,为以后的实验做好准备。