【摘 要】
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目的探讨舒林酸衍生物K80003对易损斑块巨噬细胞凋亡的影响及其分子机制。方法8周龄AopE-/-小鼠,部分结扎左颈动脉和左肾动脉制备颈动脉易损斑块模型,随机分为对照组、K80003
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目的探讨舒林酸衍生物K80003对易损斑块巨噬细胞凋亡的影响及其分子机制。方法8周龄AopE-/-小鼠,部分结扎左颈动脉和左肾动脉制备颈动脉易损斑块模型,随机分为对照组、K80003组,分别连续灌胃8周。HE染色分析斑块坏死核心大小,TUNEL染色、免疫荧光染色观察斑块内细胞凋亡水平,DHE探针检测ROS水平。同时,体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,7-酮胆固醇(7-KC)诱导细胞凋亡,Western blot检测cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白表达变化,Annexin V/PI染色、TUNEL染色检测凋亡细胞数量及所占比例,荧光探针DCF-DA检测细胞内ROS水平,Western Blot、免疫荧光、GFP-LC3II/GFP-RFP-LC3II报告质粒评估细胞自噬水平。结果1)与对照组相比,K80003组斑块内坏死核心的绝对面积及占斑块面积的比例、凋亡细胞的数量均显著减少(P<0.05),离体实验显示K80003能明显抑制7-KC诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞凋亡数量及凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3,cleaved PARP)表达;2)K80003组斑块内ROS水平显著低于对照组(P<0.05),离体实验显示K80003通过降低ROS抑制7-KC诱导的RAW264.7细胞凋亡;3)K80003显著改善7-KC诱导的RAW264.7细胞自噬流受阻,K80003通过激活细胞保护性自噬,降低氧化应激,抑制细胞凋亡。结论舒林酸衍生物K80003显著抑制AopE-/-小鼠颈动脉易损斑块巨噬细胞凋亡,并减小坏死核心,其机制主要与激活巨噬细胞保护性自噬通路、降低氧化应激有关。
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