恶性肿瘤已经成为当前世界范围内重大的公共卫生问题,严重危害人们的健康和生命。目前,临床上用于治疗恶性肿瘤的方法主要有手术、放疗、化疗和生物治疗。但因手术治疗和放疗的局限性大、复发转移率高;生物治疗的受众面小、费用昂贵;化疗依然是治疗恶性肿瘤的主要方式。而传统的化疗药物的高毒性及耐药性给肿瘤患者带来了身体和心理上的重大负担。因此毒性小、活性高、成分稳定的天然抗肿瘤药物具有很好的应用价值。本课题组前期从大型真菌光帽鳞伞（Pholiota Nameko）子实体中提取获得的18.5 k Da的蛋白PNAP,具有在体外诱导MCF-7细胞凋亡的功效;但是PNAP的体内抗肿瘤作用效果及其抗肿瘤作用机制还未研究。本研究根据实验室前期的摸索,通过构建裸鼠乳腺癌MCF-7皮下移植瘤模型,分析了PNAP的体内抗肿瘤活性及其抗肿瘤作用机制。结果显示,经PNAP治疗两周后,与对照组相比,PNAP治疗组的肿瘤组织的体积和重量显著减少,肿瘤抑制率为36.34%,说明PNAP在体内具有很好的抑癌效果。HE染色结果显示,与对照组相比,PNAP治疗组细胞排列疏松,核裂变减少,细胞轮廓不清晰,出现明显坏死迹象。免疫组化（IHC）结果显示,PNAP可以显著性降低肿瘤组织中Ki67的表达,进一步说明PNAP具有在体内抑制肿瘤生长的作用。Western Blot结果显示,PNAP可以通过诱导肿瘤组织中Akt表达量的减少,P53表达量的增加,激活下游的Caspase激酶,抑制肿瘤的生长;PNAP还可以通过抑制肿瘤组织中的TGF-β通路,下调N-Ca蛋白的表达,抑制肿瘤的侵袭和转移。此外,本研究进一步探究了PNAP抗肿瘤作用的分子机制。首先利用基因芯片技术进行基因水平的分析,结果显示,PNAP处理MCF-7细胞48 h后,有2209个基因表达上调,2411个基因表达下调;在43个有明显变化的生物途径中,变化最显著的信号通路是p53通路,其次还有Akt通路和TGF-β通路。这几条信号通路均与细胞凋亡、周期和迁移紧密相关。流式细胞仪检测结果显示,PNAP可将MCF-7细胞阻滞于G1期;划痕实验结果表明,PNAP还能显著降低MCF-7细胞的迁移能力。Western Blot结果则显示,PNAP降低了MCF-7细胞中Akt的表达,并激活了p53通路,抑制了TGF-β通路。说明PNAP的体内外抗肿瘤作用具有一致性。P53不仅是诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞的上游交汇点,还参与调节TGF-β通路;因此,推测P53是PNAP抗乳腺癌MCF-7细胞的关键因子。本研究首先利用P53抑制剂（Pftα）抑制P53的表达后,发现PNAP对MCF-7细胞的增殖抑制程度减弱。接下来,又构建了sh P53-MCF-7敲低细胞系,发现当敲低MCF-7细胞中P53的表达量后,PNAP对MCF-7细胞的凋亡诱导率显著下调;并且凋亡相关蛋白和周期相关蛋白的变化水平也明显降低。综上所述,本论文证实了PNAP在体内外均能通过抑制Akt,激活p53通路诱导乳腺癌MCF-7细胞的凋亡,抑制MCF-7细胞的增殖;通过抑制TGF-β通路,抑制MCF-7细胞的迁移;推测P53为PNAP发挥抗肿瘤作用的关键靶点之一。该研究将为天然抗肿瘤蛋白PNAP的进一步开发提供理论依据。