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鸡Blec基因位于主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)核心区域,不同MHC-B单倍型鸡的Blec基因核苷酸序列高度保守。因编码蛋白Blec的胞外区部分包含一个C型凝素样结构域(C-type lectin-like domain,CTLD),推测可能具有C型凝集素样受体(C-type lectin-like receptor,CTLR)功能,但并未经试验证实。目前Blec蛋白在鸡体内的组织分布及其功能尚未见详细报道。本研究以国家禽类实验动物种子中心培育的MHC-B单倍型B21鸡脾脏总cDNA为模板,设计引物,扩增、克隆获得鸡Blec基因的结构保守片段(Ala59-Leu176),插入pET-30a载体,成功构建原核表达重组质粒pET-Blec。转化大肠杆菌,诱导表达,SDS-PAGE分析结果表明外源蛋白以包涵体形式表达。经盐酸胍变性、稀释复性及凝胶过滤层析,获得高纯度的蛋白产物(>99%)。利用纯化的Blec蛋白免疫BALB/c小鼠,常规方法制备获得Blec蛋白特异性单克隆抗体分泌细胞株Blec-3D3。利用流式细胞术,对来自72周龄无特定病原体公鸡的外周血淋巴细胞进行检测,结果约1.0%的细胞表达Blec蛋白,而与CD3或CD4共表达的细胞分别占0.8%和0.86%;对12周龄无特定病原体鸡进行免疫组织化学检测,结果显示,在法氏囊上皮、肺三级支气管的平滑肌细胞、肾、小肠平滑肌、胸腺哈氏小体、盲肠扁桃体和脾髓质中检测到较强的特异性阳性信号,而在心脏和肝脏未检测到。用纯化的Blec蛋白筛选晶体,进行X射线衍射,获得分辨率达1.1?的衍射数据。结构分析显示,Blec蛋白(Ala59-Leu176)包含两个典型的α螺旋、两个反向平行的β折叠及三对保守的二硫键(Cys62–Cys73、Cys151–Cys164和Cys90–Cys172),呈典型CTLD特征。与已解析的人和小鼠典型的C型凝集素亚群2(C-type lectin subgroup 2,CLEC2)家族蛋白的相似度分别为47.41%(hLLT1)、42.24%(hAICL)、42.24%(mCLEC2b)、42.24%(hCD69)、41.38%(mCLEC2g)和40.52%(hKACL),推测Blec具有CLEC2家族蛋白类似功能。已知人和小鼠CLEC2家族为自然杀伤细胞表面受体NKRP1家族的配体。为探索Blec蛋白是否有相似的作用机制,能否与MHC-I类分子(MHC-I类分子介导杀伤功能)或鸡C型凝集素样蛋白BNK蛋白(免疫球蛋白样分子介导杀伤功能)相互作用,首先利用原核表达系统,分别构建、表达和纯化了B21单倍型鸡的BNK基因(获得的外源蛋白命名为BNK21)和MHC-I类分子(获得的外源蛋白命名为MHC-I-B21)。按摩尔质量比为1:1孵育过夜,经凝胶过滤层析和SDS-PAGE鉴定,结果显示原核表达的Blec与BNK21和MHC-I-B21蛋白均无明显相互作用。再利用真核表达载体分别构建成功带有标签的pCMV-Myc-Blec和p3xFlag-BNK21真核表达重组质粒,共转染人胚肾上皮细胞系HEK293T细胞,免疫共沉淀实验结果表明Blec蛋白可能与BNK21有相互作用。本研究试验证明了鸡Blec蛋白具有C型凝素样结构域,主要在鸡黏膜免疫相关组织和CD3~+CD4~+细胞表面表达,可能通过免疫球蛋白样分子介导机制发挥作用。上述研究为进一步阐明鸡自然杀伤细胞机制及免疫遗传学研究提供了重要依据。