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[目的]以糖尿病小鼠(db/db)为研究对象,比较单一使用AMD3100与AMD3100 联合粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating,G-CSF)及两者不同使用顺序对骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的动员效果,优选动员方案和时机,观察其对糖尿病创面愈合和血管化的影响,为临床糖尿病人应用EPCs进行细胞治疗提供思路和依据。[方法]第一阶段:采用AMD3100、重组人粒细胞集落刺激因子注射液(recombinant human granulocyte colony-stimulating,rhG-CSF)参考国内外文献所述剂量和方法进行骨髓EPCs的动员。选用5~6周龄雄性小鼠,随机将80只db/db小鼠分为A组(AMD3100+NS动员组),B组(AMD3100+G-CSF动员组),C组(G-CSF+AMD3100动员组)和D组(NS空白对照组);80只db/+小鼠为相应对照组,分组对应为A’组,B’组,C’组和D’组。每组在动员后第3、7、10、14天4个时间点于心脏部位取外周血,流式细胞仪检测CD34+/CD133+/Flk-1+细胞的比例。结果取平均值用均值±标准差(单位%)表示,统计学方法处理后进行比较和分析。第二阶段:选用9～12周龄雄性db/db小鼠30只,制备直径为10mm的全层皮肤缺损模型,并将小鼠随机分为E组(创伤+NS空白对照组),F组(创伤+动员组),其中动员方案选用第一阶段实验中db/db小鼠所得的最佳动员方案,并于创面形成当天开始动员。每组于动员后3、7、10、14天观察并计算创面愈合率至其中一组创面完全由上皮覆盖为止。于动员后第3、7、10、14天以及其中一组创面完全由上皮覆盖时行HE染色观察病理形态学变化以及免疫组化检测创面CD31表达情况。结果取平均值用均值±标准差(单位%)表示,统计学方法处理后进行比较和分析。[结果]第一阶段:①D组和D’组在动员后第3、7、10、14天4个时间点,CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例无差异(P>0.05),但 D’组中 CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例高于D组(P<0.05)。②A组、B组和C组db/db小鼠在动员后第3、7、10、14天4个时间点,CD34+/CD133+/Flk-l+细胞比例逐渐上升,A组至第7天达到峰值,随后逐渐下降;B组和C组至第10天达到峰值,随后逐渐下降,且在达到峰值时CD34+/CD133+/Flk-l+细胞比例与其余3个时间点相比差异有统计学意义(P<0.05)。在第10天,B组和C组db/db小鼠外周血中CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例较A组和D组高(P<0.05),但B组和C组db/db小鼠外周血中CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例之间的差异无统计学意义(P>0.05)。③A’组、B’组和C’组db/+小鼠在动员后第3、7、10、14天4个时间点,CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例逐渐上升,至第7天达到高峰,随后逐渐下降,且在第7天CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例与其余3个时间点相比差异有意义(P<0.05)。在达到峰值的第7天,C’组CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例较A’组、B’组和D’组高(P<0.05)。第二阶段:①动员后7、10、14天F组创面愈合率高于E组(P<0.05),且F组在动员后17天创面均已完全由上皮覆盖,而E组至动员后20天创面均由上皮覆盖,F组较E组提前3天达到创面愈合。②动员后3天,镜下可见创面组织胶原纤维肿胀、融合,形成均质红染的玻璃样物质、炎细胞浸润,部分血管腔内可见数量不等的红细胞,但F组较E组胶原纤维肿胀程度轻,炎细胞浸润及玻璃样变少见;动员后7天,F组镜下可见创面表皮细胞、新生毛细血管增加,创面边缘可见大量胶原纤维,排列紊乱,而E组镜下可见炎细胞浸润以及少量表皮细胞;动员后10天,F组可见部分较薄的表皮形成;动员后14天,F组镜下可见表皮细胞基本覆盖创面,连续性良好,胶原纤维排列紊乱,E组表皮细胞未完全覆盖创面,结痂下仍有炎细胞浸润;动员后17天,F组表皮增厚,角化良好,可见腺体形成,胶原纤维排列整齐,E组表皮细胞基本覆盖创面,胶原纤维排列趋于整齐。③动员后7、10、14、17天F组创面CD31阳性细胞表达量高于E组(P<0.05)。[结论]AMD3100联合G-CSF动员骨髓EPCs的效果优于单一使用AMD3100的动员效果,在非糖尿病状态下,先使用G-CSF再联合AMD3100的动员作用更优,但在糖尿病状态下先使用AMD3100再联合G-CSF的动员作用更优。AMD3100联合G-CSF动员骨髓EPCs通过促使创面血管新生,并减少炎细胞浸润和水肿,促进糖尿病创面愈合。