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目的:脑胶质瘤是人中枢神经系统中最常见的原发性颅内恶性肿瘤。尽管近年来手术切除、化疗和放疗在胶质瘤治疗方面取得了显著进展,但胶质瘤患者的预后仍然很差,在所有癌症中,5年生存率最低,病理级别高的胶质瘤患者中位生存期大约为15个月。因此探索新的有效的分子靶向治疗标志具有重要意义。本研究旨在为揭示RNA结合蛋白DGCR8和长链非编码RNA ZFAT-AS1是否在调控胶质瘤细胞生物学行为中发挥重要作用,并深入研究可能的分子调控机制,即DGCR8促进ZFAT-AS1降解以减弱其以PRC2依赖的方式对CDX2的转录抑制,上调CDX2的表达,促进胶质瘤细胞的生物学行为。研究方法:首先培养人胶质瘤细胞U87、U251和人星型胶质细胞HA。通过quantitative Real-time PCR方法和Western blot方法检测在瘤周脑实质、胶质瘤组织、人星型胶质细胞、胶质瘤细胞中,DGCR8、ZFAT-AS1、CDX2和RRM2B的表达水平。为进一步检测其对胶质瘤细胞生物学行为的作用,通过细胞稳定转染方法分别构建DGCR8沉默的细胞系,以及ZFAT-AS1、CDX2和RRM2B过表达和表达沉默的细胞系,并且应用细胞活性CCK-8法、流式细胞仪、迁移侵袭Transwell法分别检测细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的变化。分别应用quantitative Real-time PCR和Western Blot方法检测DGCR8、ZFAT-AS1、CDX2和RRM2B的表达水平变化。RIP实验验证DGCR8和ZFAT-AS1的结合作用。RIP实验和RNA pull-down实验验证ZFAT-AS1与亚基EZH2的结合,ChIRP实验验证ZFAT-AS1存在于CDX2启动子区,ChIP实验检测CDX2启动子区发生H3K27me3修饰。ChIP实验和荧光素酶基因报告系统分析CDX2分别与RRM2B、DGCR8启动子区的直接结合作用。裸鼠皮下移植瘤实验和裸鼠脑原位瘤实验分别检测DGCR8和ZFAT-AS1对裸鼠移植瘤的抑瘤效应和对裸鼠的生存时间的影响。结果:本研究发现DGCR8、CDX2和RRM2B在胶质瘤组织和细胞中高表达,ZFAT-AS1低表达。沉默DGCR8、CDX2和RRM2B的表达以及过表达ZFAT-AS1抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进胶质瘤细胞凋亡。DGCR8通过降低ZFAT-AS1的稳定性下调其表达,进而促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制胶质瘤细胞的凋亡。ZFAT-AS1与PRC2的催化亚基EZH2结合,并共同存在于CDX2的启动子区。ZFAT-AS1通过招募并结合PRC2在CDX2启动子区诱导的H3K27me3修饰作用,进而抑制CDX2的转录和表达,抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进胶质瘤细胞凋亡。CDX2与RRM2B的启动子区结合,促进其转录和表达,进而促进胶质瘤细胞恶性生物学行为。CDX2与DGCR8启动子区结合,促进其转录和表达,形成正反馈环路共同调控胶质瘤细胞生物学行为。联合应用DGCR8沉默和ZFAT-AS1过表达对裸鼠移植瘤的抑瘤效应最佳,并对原位瘤裸鼠的生存期延长效应最显著。结论:1.DGCR8、CDX2和RRM2B在胶质瘤组织和细胞中高表达,ZFAT-AS1低表达。沉 默DGCR8、CDX2、RRM2B的表达以及过表达ZFAT-AS1能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡。2.DGCR8能够降低ZFAT-AS1的稳定性。沉默DGCR8的表达,通过增强ZFAT-AS1的稳定性,抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。3.ZFAT-AS1与PRC2的催化亚基EZH2结合,增强PRC2在CDX2启动子区诱导的H3K27me3修饰作用,增强对CDX2的转录抑制作用,降低CDX2的表达,进而抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。4.CDX2通过与靶基因RRM2B的启动子区结合,促进其转录,进而促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并抑制细胞凋亡。CDX2通过与DGCR8的启动子区结合,促进其转录,进而形成正反馈环路,共同调控胶质瘤细胞生物学行为。