蒙古牛MSTN基因敲除的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:juyang0303
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肌肉生长抑制素基因(MSTN)的突变可导致动物肌肉的显著增长,这一发现提示可以通过抑制该基因的表达提高动物肌肉的产量。本研究旨在通过基因敲除的方式建立转基因体细胞系。首先,从蒙古牛肌肉组织中提取蒙古牛基因组DNA,根据基因序列设计引物,利用PCR技术扩增得到用于载体构建的同源序列。其次,构建基因打靶载体。同时,以组织块贴壁法原代培养获得蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞。将载体转染入细胞后经正筛选,共获得253个细胞克隆,将这些单克隆细胞提取基因组DNA进行PCR扩增鉴定得到2个阳性克隆。与普通成纤维细胞相比,所得敲除MSTN基因的阳性细胞克隆在细胞形态、性状及生长特性等方面均发生了极其显著的变化,表现为细胞体积增大;边界模糊,立体感降低;生长速率下降明显;胰蛋白酶消化所需时间明显增加。研究认为,细胞形态和生长特性的改变可能受到转染过程、经过药物筛选、长时间在体外培养的影响,也可能与MSTN基因的敲除有关。本研究为采用分子育种手段培养高产肉量蒙古牛奠定了一定的基础。
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