论文部分内容阅读
目的：本实验通过对槐耳浸膏体外诱导人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901凋亡及抑制MMP-2和MMP-9表达的研究,为槐耳浸膏在临床上治疗胃癌提供理论依据。方法：浓度为Omg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml的槐耳浸膏分别作用于胃癌细胞系MKN-45和SGC-790124h,经AO/EB荧光染色后,显微镜下观察其形态学表现；浓度为Omg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml的槐耳浸膏分别作用于胃癌细胞系MKN-45和SGC-790124h、48h、72h后,运用流式细胞技术分析其凋亡率；浓度为Omg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml的槐耳浸膏作用于胃癌细胞系MKN-45及SGC-790124h后,采用RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9的表达情况。结果：荧光显微镜下,正常细胞呈绿染,大小均一,结构完整；凋亡细胞呈黄染,形态不规则,细胞膜可见芽状突起,细胞核固缩、碎裂,染色质浓染沿核膜分布；坏死细胞染成红色,大小形态较均一。随着药物浓度的增加,凋亡细胞与坏死细胞比例逐渐增加。流式细胞仪检测结果示槐耳浸膏作用于MKN-45细胞24h后,对照组、5mg/ml组、10Omg/ml组及20mg/ml组的凋亡率(%)分别为6.52±0.87、14.58±1.03、18.00±1.13、23.13±1.24；作用于MKN-45细胞48h后,凋亡率(%)依次为7.27±1.16、18.31±1.65、24.47±1.33、27.16±1.66；作用于MKN-45细胞72h后,凋亡率(%)依次为7.45±0.96、50.23±1.55、58.00±1.87、68.98±1.43。槐耳浸膏作用于SGC-7901细胞24h后,对照组、5mg/ml组、10mg/ml组、20mg/ml组的凋亡率(%)分别为12.89±1.01、19.40±1.15、21.96±1.67、23.05±1.89；作用48h后凋亡率(%)分别为10.05±1.33、40.89±1.40、51.57±1.96、66.22±1.88；作用72h后凋亡率(%)分别为27.37±1.78、49.69±1.35、65.07±1.43、69.01±1.97。浓度相同,两种细胞的凋亡率均随着时间的增加而增加；同一时间,两种细胞的凋亡率均随着浓度的增加而增加(P<0.05)。相同作用条件,SGC-7901细胞的凋亡率较MKN-45细胞有增高趋势。RT-PCR结果显示槐耳浸膏作用于胃癌MKN-45细胞后,对照组、5mg/ml组、110mg/ml组及20mg/ml组的MMP-2的表达量依次为0.64±0.02、0.49±0.01、0.36±0.02、0.32±0.01；MMP-9的表达量依次为0.71±0.01、0.54±0.02、0.47±0.02、0.39±0.02(P<0.05)。槐耳浸膏作用于胃癌SGC-7901细胞后,对照组、5mg/ml组、10mg/ml组及20mg/ml组的MMP-2的表达量依次为0.64±0.01、0.42±0.02、0.344±0.20、0.29±0.01；MMP-9的表达量依次为0.65±0.15、0.47±0.01、0.44±0.01、0.39±0.02(P<0.05)。与对照组相比,两种细胞各浓度组MMP-2和MMP-9表达水平均减少(P<0.05)。随着浓度的增加,MMP-2和MMP-9的表达水平逐渐降低。结论：槐耳浸膏在体外可诱导胃癌MKN-45和SGC-7901细胞的凋亡,并表现为剂量依赖性和时间依赖性；槐耳浸膏在体外可明显抑制胃癌MKN-45和SGC-7901细胞基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,并具有浓度依赖性；人胃癌细胞系分化程度越高,槐耳浸膏的诱导凋亡和抑制MMP-2和MMP-9表达的作用越大。槐耳浸膏可诱导胃癌细胞凋亡和抑制其侵袭转移,具有一定抗肿瘤作用,为临床应用槐耳治疗恶性肿瘤提供了理论基础。