【摘 要】
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果胶酶广泛应用于食品、饲料、纺织、造纸和医药等领域。本文采用特定选择培养基,从现有300余份菌种资源中筛选出高产果胶酶的菌株CXJZU-120。通过该菌株生长及产果胶酶的特
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果胶酶广泛应用于食品、饲料、纺织、造纸和医药等领域。本文采用特定选择培养基,从现有300余份菌种资源中筛选出高产果胶酶的菌株CXJZU-120。通过该菌株生长及产果胶酶的特性研究,获得适宜的种子培养基及产酶培养基配方,将该菌株接种到种子培养基培养6小时后转接到产酶培养基培养9小时的发酵液酶活达到158U/ml,比CXJZ95-198菌株提高66%以上。采用DNS法对其果胶酶活力测定条件进行探索,确定其酶促反应条件为:温度50℃,以桔子果胶为底物、浓度0.20%,1/15mol·L-1KH2PO4-Na2HPO4缓冲液pH5.2。对果胶酶合成模式研究结果表明,该菌株果胶酶合成模式为延续合成型。采用超滤工艺提纯果胶酶,获得优化的该菌株所产果胶酶提纯工艺技术参数:发酵液中添加0.5mmol·L-1至1.0mmol·L-1的DTT,超滤控制操作压≤1.0bar,比活力提高20.28%,回收率由30.91%提高至83.90%,纯化倍数由4.73提高至5.72。通过Sephadex G-100凝胶柱层析及SDS-PAGE对超滤纯化果胶酶的酶学性质进行研究表明:超滤过程能使蛋白质种类明显减少,K+、Ca2+、Ba2+、Mn2+、Co2+、Ag+离子对该菌株果胶酶有激活作用,其中,Mn2+可使酶活提高1.7倍;Cu2+、Hg2+、Fe3+离子有抑制作用,其中,Fe3+降低酶活67%。
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