NgR特异性siRNA及NT-3基因转染对大鼠脊髓损伤修复的影响

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目的:研究NgR特异性siRNA体内干扰及NT-3基因体内转染对大鼠脊髓损伤修复的作用。方法:选用由中南大学实验动物部提供的SD大鼠108只,体重200—250g,雌雄不限。随机平均分为假手术组(n=27)、手术对照组(n=27)、NgR-siRNA组(n=27)和NgR-siRNA+NT-3组(n=27)。每组按照手术后12h、1d、2d、3d、5d、7d、14d、21d和28d9个时间点再平均分为9个小组,每小组3只。在T8椎板水平,用做好标记的显微剪刀剪断脊髓的背侧2/3,制作大鼠半横断损伤模型,用微量注射器自损伤处头尾两端缓慢注入细胞浓度1×106/ml相应细胞悬液10μl,5min内注射完毕留针5min,并用医用生物胶封闭针孔防止细胞悬液顺针道溢出。利用BBB评分评价大鼠运动功能恢复情况;相应时间点获取损伤段脊髓标本,利用QPCR、Wb测定NT-3、NgR、 GAP-43基因表达的变化,综合评价RNA干扰沉默NgR基因及联合NT-3基因转染对大鼠脊髓损伤后修复的影响。所得数据采用均数和标准差进行一般描述;各组之间的比较采用方差分析,进行两两比较。结果:1、脊髓损伤术后7d、14d、21d、28d NgR-siRNA+NT-3组BBB评分明显高于NgR-siRNA组、损伤对照组,有统计学差异(P<0.05)。2、QPCR结果显示:NgR-siRNA+NT-3组NT-3、GAP-43基因表达水平升高更明显,有统计学差异(P<0.05); NgR-siRNA+NT-3组NgR基因表达水平下降更明显,有统计学差异(P<0.05)。3、Wb结果显示,NgR-siRNA+NT-3组损伤后NT-3、GAP-43蛋白表达增高最明显,有统计学差异(P<0.05); NgR-siRNA+NT-3组NgR蛋白表达下降最明显,有统计学差异(P<0.05)。结论:RNA干扰沉默NgR基因及联合NT-3基因转染,可改善NgR受体相关髓磷脂抑制因子的作用及NT-3增加神经营养作用可促进脊髓损伤的修复。
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