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目的研究益气逐瘀解毒颗粒调节Girdin表达治疗大鼠肝纤维化的作用机制。方法将123只SD雄性大鼠随机分成模型对照组和空白对照组,模型对照组予以CCL4、橄榄油混合液(2:3),皮下注射造模,7周后将模型组大鼠随机分成中药高、中、低剂量组,阳性对照组,模型对照组,原空白对照组不变。中药组即益气逐瘀解毒颗粒高、中、低三个剂量组,阳性对照组用扶正化瘀胶囊干预,模型对照组和空白对照组等体积蒸馏水灌胃,5周后处死大鼠,取肝脏、血清标本,进行相关指标检测:(1)采用HE、MASSON染色法检测肝组织损伤及肝纤维化病理指标;(2)ELISA法检测血清HA、LN表达水平;(3)生化实验法检测血清肝功指标ALT、AST、γ-GT水平;(4)RT-PCR法检测肝纤维化相关因子MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、Col1A1、Col1A2的表达;(5)RT-PCR法检测肝纤维化相关通路中关键因子PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3、PKA、CREB的表达;(6)RT-PCR法、Western Blot、免疫组化法检测Girdin的表达(7)免疫组化法检测肝组织中α-SMA表达;结果1、CCL4造模结果(1)一般情况:除空白对照组外,模型对照组大鼠精神状态及饮食变化明显,大小便异常,注射药物部位皮肤溃烂,毛发脏乱、粗糙,脱落明显,有死亡情况。肝标本大体情况:造模结束可见肝标本萎缩,体积变小,色暗、无光泽,表面颗粒样凸起明显,质硬。(2)造模病理结果:肝纤维化形成,纤维间隔由中央静脉和汇管区向周围延伸,分割肝小叶,并有明显形成假小叶的趋势,肝纤维化分级达到3级或以上。2、益气逐瘀解毒颗粒治疗结果(1)一般情况:治疗组大鼠的精神状态良好、饮食可、皮毛及色泽较造模时有显著改善,皮下溃烂逐渐好转,大鼠体重均明显增加。(2)肝脏标本大体情况:益气逐瘀解毒颗粒各剂量组,肝脏色红,有光泽,表面光滑,无颗粒样凸起,质地均匀,边缘稍钝;阳性对照组少数肝脏色暗,无光泽,质较硬,萎缩、边缘钝;模型对照组大多数肝标本色暗,无光泽,萎缩,质硬,周围圆钝;空白对照组肝脏标本色鲜红,有光泽,质软,边缘锐利。(3)病理指标检测结果:益气逐瘀解毒颗粒各剂量组,胶原纤维含量与模型对照组比较明显减少,肝小叶结构清晰,纤维组织主要分布在汇管区、中央静脉及其周围,低剂量组部分病理切片可见形成较细条索状结构甚至向周围延伸;阳性对照组中仅有少数出现小叶结构被较粗的纤维间隔分割;模型对照组多数肝脏病理切片的肝小叶被较粗的纤维间隔分割;空白对照组仅少数胶原纤维分布于汇管区、中央静脉。MASSON染色半定量评分结果:益气逐瘀解毒颗粒高剂量组与模型对照组比较,评分显著降低(p<0.01)。(4)生化指标检测结果:各组肝功均在正常范围。与空白对照组比较,模型对照组AST、ALT、γ-GT水平显著升高(p<0.05);与模型对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒高剂量组AST、ALT、γ-GT的水平显著降低(p<0.05);(5)ELISA法检测肝纤维化指标LN水平的结果:模型对照组与空白对照组比较,LN水平显著升高(p<0.01);与模型对照组比较,各个药物干预组中均可见LN显著降低(p<0.05);益气逐瘀解毒颗粒低剂量组与阳性对照组(扶正化瘀组)比较,LN含量显著下降(p<0.05).(6)RT-PCR法检测大鼠肝组织中MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、Col1A1、Col1A2表达的结果:与空白对照组比较,模型对照组MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13表达量显著下降(p<0.05),TIMP-1、Col1A1、Col1A2表达显著升高(p<0.05);与模型对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒高剂量组MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13表达量显著升高(p<0.05),TIMP-1、Col1A1、Col1A2表达显著下降(p<0.05);(7)RT-PCR法检测大鼠肝组织中Girdin、PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3、PKA、CREB表达结果:(1)与空白对照组比较,模型对照组Girdin、PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3的表达显著升高(p<0.05),PKA、CREB的表达显著下降(p<0.05);(2)与模型对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒高剂量组Girdin、PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3表达显著下降(p<0.05),PKA、CREB的表达显著显著升高(p<0.05);(3)与阳性对照组比较,中药高剂量组Girdin、PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3表达显著下降(p<0.05),PKA、CREB的表达显著显著升高(p<0.05);(8)Western Blot、免疫组化法检测肝组织中Girdin的表达结果:(1)与空白对照组比较,模型对照组Girdin表达量显著升高(p<0.01);(2)与模型对照组比较,中药高剂量组Girdin表达量显著下降(p<0.05);(9)免疫组化法检测肝组织中α-SMA表达结果:(1)与空白对照组比较,模型对照组α-SMA表达量显著升高(p<0.01);(2)与模型对照组比较,各个治疗组α-SMA表达量显著下降(p<0.01);(3)与阳性对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒高、中剂量组α-SMA表达量显著下降(p<0.05);(4)益气逐瘀解毒颗粒低剂量组与阳性对照组比较,无显著差异(p>0.05);结论1、皮下注射CCL4成功构建肝纤维化大鼠模型;2、益气逐瘀解毒颗粒具有抗肝纤维化作用;3、益气逐瘀解毒颗粒能通过下调Girdin表达,使促纤维化信号通路受抑,最终起到治疗肝纤维化的作用;