高原的低压和低氧环境的影响下,长期居住或急进高原地区的人群容易引发不同程度的高原肺动脉高压(HAPH),HAPH情况的加重进一步会导致高原肺水肿的发生,不及时救助在短时间内可造成昏迷甚至死亡,是高原病中主要死亡因素。了解和探究HAPH发病原因,对高原病的防止有重要意义。为了探讨miR-322在对高原肺动脉高压发生发展的影响及作用机制,分别做了体外实验及体内实验。1.体外实验:分别用肺动脉平滑肌细胞、肺血管内皮细胞、RAW264.7三种细胞系体外分组为常氧组(N组)、缺氧组(H组)、空白病毒转染+缺氧组(空载组)、miR-322抑制+缺氧组(miR-322组),通过Real-time PCR检测apelin m RNA和miR-322变化;Western blot检测apelin蛋白表达变化、MTT细胞增殖检测以及平板划痕实验验证细胞迁移以验证miR-322对体内调控apelin蛋白和基因的表达影响。2.体内实验:进一步探索miR-322在动物体内影响结果将40只SD雄性大鼠随机分为4组,常氧组(N组)、缺氧组(H组)、空白病毒+缺氧组(空载组)、miR-322抑制+缺氧组(miR-322组)。通过HE染色观察肺组织变化;Real-time PCR检测肺组织中miR-322和apelin m RNA基因表达,免疫荧光观察组织中apelin、CD31和α-SMA表达变化。免疫组化检测apelin表达情况,Western blot法检测大鼠肺组织中apelin蛋白的表达结果。结果:1.体外实验:PCR及Western blot H组比N组miR-322及apelin m RNA表达均上升,miR-322组较H组,miR-322表达下降同时apelin表达上升。MTT细胞增殖,H组较N组增殖速度下降,miR-322组较H组增殖速度上升。平板划痕实验中H组比N组迁移速度下降,miR-322组较H组迁移速度上升。2.体内实验:HE染色结果显示肺组织形态,N组肺泡间隔正常,组织结构良好;低氧组及空载组肺泡间隔明显增宽,肺泡腔中大量出现炎性细胞,损伤严重。miR-322组较H组损伤情况减轻。RT-PCR中,H组较N组均apelin m RNA及miR-322表达均上升,miR-322组较H组apelin表达上升;免疫荧光中H组、空载组、miR-322组较常氧组apelin、CD31和α-SMA表达不同程度上升。免疫组化中apelin表达H组较N组上升,miR-322较H组进一步上升。Western blot结果显示H组apelin表达上升,miR-322组较H组进一步上升。