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目的肿瘤的发生发展是一个多因素参与、多步骤发展过程,在这一过程中机体免疫功能等因素起重要作用,因此,在肿瘤疾病的诊疗过程中,除了传统的手术及放化疗,还要强调纠正全身性存在的免疫缺陷。在此研究背景下,肿瘤生物治疗的概念应运而生,成为肿瘤治疗第四种的模式。其中以CIK和DC细胞为基础的抗肿瘤免疫治疗以其独特的优势,成为国内外研究的热点。树突状细胞(Dendritic cells, DC)是功能强大的专职抗原提呈细胞(antigen presenting cell, APC),可高效介导对特异性抗原的特异性免疫应答。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells, CIK)是一种新型高效的免疫效应细胞,具有非MHC限制杀瘤活性、增殖速度快、杀伤活性高等优点。研究者们将能够识别抗原、激活免疫系统的DC与具有高效杀瘤活性的CIK联合应用于肿瘤治疗,为肿瘤的生物治疗开辟了新的视角。本实验将经A549肺腺癌抗原负载的与未经抗原负载的DC与CIK共培养,观察培养物的细胞表型、增殖活性和杀伤活性的变化。将DC-CIK应用于55例晚期恶性肿瘤患者,观察患者近期临床疗效和免疫功能的变化,为临床生物免疫治疗提供依据。方法1.采集人外周血单个核细胞,在体外培养获得成熟的DC、CIK；制备A549肺腺癌细胞可溶性抗原；制备效应细胞分别为：单独培养的CIK、未经抗原负载DC-CIK以及经抗原负载的DC-CIK (Ag-DC-CIK);动态观察CIK细胞的增殖活性及不同的效靶比时的杀伤活性；采用流式细胞仪检测细胞表型。2.选取55例晚期恶性肿瘤患者行DC-CIK细胞2周期治疗,同时给予最佳营养支持治疗,治疗期间严密观察患者不良反应及一般情况变化,测定患者治疗前后的T细胞亚群、CD4+CD25+调节T细胞、NK细胞及相关肿瘤标记物,对比治疗前后变化,并行影像学检查评价疗效。结果1.Ag-DC-CIK组与DC-CIK组共培养物,于第10天开始明显增快,且增殖活性高,与单独培养的CIK细胞相比有明显差异(P<0.05)。2.DC与CIK共培养14d时,Ag-DC-CIK组高表达CD3+CD8+(89.68±2.42)%、CD3+CD56+(76.43±3.98)%,与CIK组和DC-CIK组相比均具有显著性差异(P<0.05)。经抗原负载的成熟DC表面高表达特异性标志,其中HLA-DR(87.71±6.30)%,CD86(84.23±3.84)%,CD83(92.10±3.52)%,CD40(78.41±4.21)%,与DC-CIK组相比均具有显著性差异(P<0.05)。3.Ag-DC-CIK组共培养细胞在20：1效靶比时对A549靶细胞的杀伤活性最高,与CIK及DC-CIK组比较均具有显著性差异,P值分别<0.01,<0.05。4.55例接受治疗的患者中,除3例未见明显变化外,其余均不同程度地出现食欲和体力改善,癌性疼痛减轻及体重增加。5.DC-CIK治疗后1个月患者外周血CD8+T细胞、CD4+CD25+调节T细胞下降,CD3+、CD4+T细胞及CD4+／CD8+比值及NK细胞计数较治疗前升高。6.DC-CIK治疗后1个月复查影像学评价治疗有效率(CR+PR)为23.63%,临床获益率(CR+PR+SD)为81.81%。监测血清肿瘤标志物,其中CEA、CA125及AFP下降有显著性差异(P<0.05),CA724治疗前后的变化无显著性差异(P>0.05)。7.回输过程中共有6例出现过发热,一般在38℃左右,持续3～5小时,未见过敏、休克等不良反应,未见骨髓抑制、肝肾受损等。结论1.DC、CIK共培养,其主要效应细胞为CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞；抗原负载的和未负载的DC均可增强CIK的增殖活性；抗原负载的DC与CIK共培养在较低效靶比时即可达到较高杀伤活性。2.晚期恶性肿瘤患者经DC-CIK体细胞治疗2疗程后,大多数患者的一般情况得到明显改善,T细胞亚群比例失调的状况得到不同程度的改善,肿瘤得到有效控制,明显提高了生活质量,且未见明显不良反应,具有较高的安全性。