本文主要从以下几部分展开： 第一部分CXCL12-CXCR4在头颈部鳞状细胞癌的表达与淋巴结转移的关系 目的：观察趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在头颈部鳞癌(headandnecksquamouscarcinoma，HNSCC)组织及颈部淋巴结中的表达情况，分析CXCL12、CXCR4的表达与头颈鳞癌临床、病理的关系，探讨CXCL12-CXCR4生物轴在头颈鳞癌淋巴结转移中的作用。 方法：总结2005-2006年于天津肿瘤医院头颈科手术切除及活检的65例具有完整临床病理资料的头颈部鳞癌标本特点，以正常口腔黏膜组织及良性肿瘤15例作为对照，用免疫组织化学染色及RT-PCR方法检测CXCL12、CXCR4在各组中的表达情况，观察不同组别CXCL12、CXCR4的表达区别及其与HNSCC临床生物学行为--主要是淋巴结转移--的关系。 结果：头颈鳞癌患者CXCR4免疫组化阳性率：I-II期为26.9％(7/26)，III-IV期为71.8％(28/39)，差异有显著性(P<0.01)；鳞癌高、中分化者阳性率为42.6％(20/47)，低分化为83.3％(15/18)，差别有显著性差异(P<0.01)；有淋巴结转移组阳性率71.4％(25/35)，无转移组阳性率为33.3％(10/30)，正常对照组表达极低，差别有显著性差异(P<0.05)。原发灶CXCL12的阳性率在所有临床、病理参数分组的表达高低均无统计学差异(P>0.05)，在良性及正常组织对照中为低表达。 RT-PCR结果：发生转移组中CXCR4表达明显高于非转移组及对照组(P<0.05)；而未转移组CXCR4表达高于良性对照组表达(P<0.05)。有转移瘤组织的淋巴结CXCR4的表达明显高于无转移组织的淋巴结(P<0.05)，而两组淋巴结中CXCL12的表达无显著性差异(P>0.05)。 结论：趋化因子CXCL12在转移靶器官(淋巴结)的表达明显高于非靶器官(脂肪)的表达；趋化因子受体CXCR4的高表达与口腔鳞状细胞癌发生淋巴结转移及临床分期密切相关。CXCR4表达高低可能会影响CXCL12的趋化作用，验证了CXCL12-CXCR4生物轴能够促进HNSCC向颈淋巴结的定向转移。 第二部分CXOL12-KDEL融合基因的构建与鉴定及其“胞内捕获”CXCR4抗CXCL12-CXCR4趋化口腔鳞癌转移的实验研究 目的：构建内质网滞留序列KDEL及趋化因子CXCL12的融合基因CXCL12-KDEL(带有E-tag标签)，克隆入pIRES2-EGFP真核表达载体。融合基因CXCL12-KDEL转染人高转移口腔鳞状细胞癌细胞系Tb3.1，抑制CXCR4在细胞膜表达，从而阻断CXCL12-CXCR4生物轴，观察对肿瘤细胞的趋化作用的影响。 方法：在GenBank检索人CXCL12基因编码序列，确定扩增区域，设计引物并加入KDEL序列。取口腔鳞癌的颈部转移淋巴结，以Trizol提取总RNA，使用RT-PCR方法获得CXCL12-KDEL融合基因的编码序列，克隆入pMD19-T载体。测序鉴定后亚克隆至plRES2-EGFP真核表达载体中，并再次测序验证。使用脂质体将CXCL12-KDEL真核表达载体转染至高转移人口腔鳞状细胞癌细胞系Tb3.1，观察转染效率(实验组)。同时以转染空载体pIRES2-EGFP组和未转染细胞组作为对照组，进行以下功能试验：Westernblot实验检测转染融合基因后的癌细胞中带有E-tag标签的CXCL12的蛋白表达；流式细胞仪检测转染后细胞膜CXCR4蛋白表达；Chemotaxischamber细胞趋化实验检测转染后鳞癌细胞对CXCL12的趋化、迁移能力。对比实验组与对照组的差异。 结果：经测序证实，正确构建了人CXCL12-KDEL融合基因，并克隆入真核载体pIRES2-EGFP，获得CXCL12-KDEL-pIRES2-EGFP重组载体。脂质体转染CXCL12-KDEL-pIRES2-EGFP至鳞癌细胞系Tb3.1，72h效率最高，达50％以上。Westernblot检测证实实验组转染细胞有E-tag标记的CXCL12蛋白表达，而两对照组及三种细胞上清中均无E-tag标记的CXCL12蛋白表达。转染后实验组细胞膜CXCR4表达明显较对照组降低。转染CXCL12-KDEL组、pIRES2-EGFP组及未转染组受CXCL12趋化迁移的鳞癌细胞数分别为216.00±84.12，711.33±49.54，825.67±62.80，转染CXCL12-KDEL细胞趋化较两对照组明显减少。 结论：成功构建了表达CXCL12-KDEL融合基因的真核表达载体。CXCL12-KDEL基因转染后，由于内质网滞留作用，鳞癌细胞膜表达CXCR4被抑制，阻断了CXCL12-CXCR4生物轴对鳞癌细胞的趋化、转移作用；CXCL12-CXCR4生物轴是促进头颈部鳞癌转移的重要因素。