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大量研究报道,n-3多不饱和脂肪酸（n-3 PUFA）具有免疫调节作用,可调节动物免疫功能,维持动物健康,使动物发挥最大生产性能。B淋巴细胞主要在体内通过分泌IgA而执行体液免疫,对动物机体的免疫机能发挥着重要的作用。n-3 PUFA对肠道粘膜健康状态的调控直接影响肉仔鸡的生长性能,但目前关于n-3 PUFA免疫调节功能的研究主要集中在人和实验动物上,对家禽的研究很少。n-3 PUFA调控肠道粘膜免疫反应的具体机制仍不清楚,致使在现实生产操作中应用n-3 PUFA营养调控肉仔鸡免疫应激反应及其生长性能具有很大的盲目性。大量的研究主要集中在n-3 PUFA发挥免疫调节作用方面,很少关注其主要成分二十碳五烯酸（EPA ）和二十二碳六烯酸（DHA ）的浓度和比例。基于以上方面的问题,本研究进行了如下试验:1.肉仔鸡肠道B淋巴细胞体外免疫应激模型的建立体外通过体外添加不同浓度（0,5,10,15,20μg/mL）脂多糖（LPS）摸索其对肉仔鸡肠道B淋巴细胞体外增殖的影响,确定体外免疫应激模型最适的LPS工作浓度;通过尼龙棉柱结合流式细胞仪检测法分离鉴定B淋巴细胞,观察细胞形态及活细胞率建立肉仔鸡肠道B淋巴细胞的体外分离培养方法。试验结果表明,胶原酶-1消化法B淋巴细胞比率可达96.46%,活细胞比率为97%;LPS可作为肉仔鸡肠道B淋巴细胞体外模拟免疫应激的刺激源,且最佳浓度为10μg/mL。2.体外发挥免疫调节作用的最佳EPA和DHA组合研究添加不同浓度（0,20,40,60,80μg/mL）和比例（0:1,1:0,1:1,1:2,2:1）的EPA与DHA组合对免疫应激状态下肉仔鸡肠道B淋巴细胞体外增殖分化、IgA分泌、CD5和CD79a表达的影响,旨在找出体外最佳调节肉仔鸡肠道B淋巴细胞免疫应激的EPA与DHA比例和浓度。试验结果表明,不同浓度和比例的EPA与DHA组合可抑制B淋巴细胞的体外增殖;当EPA与DHA比例为1:1,浓度为20μg/mL,比例为2:1,浓度为20μg/mL和40μg/mL时,B淋巴细胞分泌的IgA水平较其余各组显著降低;当EPA与DHA比例为2:1,浓度为20μg/mL时,CD5和CD79a的表达显著高于对照组及其余试验组。外源添加不同比例和浓度的EPA与DHA可以抑制肉仔鸡B淋巴细胞体外增殖,其发挥免疫调节作用可能是通过改变体液免疫IgA的分泌以及CD5和CD79a表达来实现的,且调控肉仔鸡肠道B淋巴细胞体外增殖分化、IgA分泌水平和CD5+ CD79a表达的最佳EPA与DHA组合为二者比例2:1,浓度为20μg /mL。3.利用体外建立的B淋巴细胞免疫应激模型,研究分别单独添加EPA、DHA和混合添加EPA与DHA（2:1,20μg/mL）对B淋巴细胞膜脂肪酸组成、胞内Ca2+浓度、PGE-2和COX-2的影响,探讨其发挥免疫调节作用的Ca2+途径和类二十烷酸途径。试验结果表明,单独添加EPA与DHA组和EPA与DHA比例为2:1,浓度为20μg/mL处理组均可显著影响B淋巴细胞膜脂肪酸组成、胞内Ca2+浓度、PGE-2和COX-2表达量。EPA与DHA发挥其免疫调节作用有可能是通过改变Ca2+途径和类二十烷酸途径实现的。4.利用体外建立的B淋巴细胞免疫应激模型,研究最佳组合的EPA与DHA对B淋巴细胞cAMP、cGMP、PLC和IP3表达的影响,探讨其调节肉仔鸡肠道B淋巴细胞免疫功能的第二信使途径和磷脂酰肌醇信号通路调控机理。试验结果表明,单独添加EPA与DHA组及EPA与DHA比例为2:1,浓度为20μg/mL处理组均可显著影响B淋巴细胞胞内第二信使cAMP、cGMP表达、PLC和IP3含量,同时EPA与DHA比例为2:1,浓度为20μg/mL处理组对肉仔鸡肠道B淋巴细胞第二信使cAMP、cGMP表达、PLC和IP3含量影响最为显著。通过上述试验成功构建了肉仔鸡肠道B淋巴细胞体外免疫应激模型,EPA与DHA通过抑制肉仔鸡肠道B淋巴细胞体外增殖,进而抑制IgA分泌和CD5+ CD79a的表达发挥其免疫调节作用,且体外最佳的EPA与DHA比例为2:1,浓度为20μg/mL。n-3 PUFA可能是通过抑制肉仔鸡肠道B淋巴细胞增殖分化、进而降低IgA分泌,改变其标志分子CD5和CD79a的表达发挥其免疫调节作用。同时,添加EPA与DHA可以改变B淋巴细胞膜脂肪酸组成,进而降低细胞内Ca2+浓度,抑制类二十烷酸PGE-2表达,下调磷酸肌醇信号通路中PLC和IP3表达,改变第二信使信号通路cAMP、cGMP表达等作用途径共同实现其免疫调节作用。本研究为n-3 PUFA在家禽特别是肉仔鸡免疫调节作用的研究,改善肠道健康提供理论依据。