茶尺蠖幼虫肠道细菌与联苯菊酯抗药性间关系的研究

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昆虫肠道菌群的功能被广泛的研究,关于昆虫杀虫剂抗性产生原因的研究也有很多,但是关于昆虫肠道菌群和杀虫剂抗性相关联系的研究相对较少。本研究目的在于揭示茶尺蠖杀虫剂抗性与肠道菌群间作用关系,主要结果如下:1.不同抗生素浓度对茶尺蠖生存率及肠道细菌清除效果的影响该部分的实验中,使用了200μg/m L、300μg/m L和400μg/m L三种浓度的抗生素混合到茶粉饲料中,比较三种抗生素浓度的茶粉饲料、纯茶粉饲料以及茶叶饲喂下茶尺蠖的生存率,抗生素对于茶尺蠖生理生殖的影响及微生物清除效果。结果显示:400μg/m L浓度的茶粉饲料存活率极低,茶尺蠖无法完成其生活史,300μg/m L及其以下的抗生素浓度不会对茶尺蠖的生长发育有害。而不同浓度的抗生素对于茶尺蠖肠道菌群的清除效果也不同,PCR电泳结果可以得出300μg/m L浓度可以有效清除其肠道菌群,而200μg/m L浓度的抗生素茶粉饲料反而导致茶尺蠖肠道菌群数量增加,而体外培养的实验和实时荧光定量逆转录也验证了300μg/m L浓度的抗生素能有效的清除茶尺蠖的肠道菌群。2.茶尺蠖肠道细菌介导抗药性的探究我们将茶尺蠖分为两个品系饲养,一个品系施加联苯菊酯杀虫剂的压力,另一个品系正常的继代饲养。将两个品系同样继代培养十四代,培育形成了抗性品系和敏感品系。使用点滴法测试抗性品系,其半致死浓度由最初的20.924μg/m L升高到了47.427μg/m L,而敏感品系的则降低到了13.997μg/m L,而对于第十四代的胃毒法检测发现,抗性品系的半致死剂量为68.775μg/m L,敏感品系为33.385μg/m L,达到了2.06倍。在抗生素处理后,敏感品系的半致死剂量几乎没有变化,但是抗性品系的半致死剂量却显著性的降低到了48.220μg/m L。而体外降解的实验中,我们将联苯菊酯作为唯一碳源,将抗性品系和敏感品系的茶尺蠖肠道菌液进行体外培养,只在抗性品系中分离鉴定得到了表皮短杆菌Brevibacterium epidermidis,其对于联苯菊酯降解率达到43.98%。将表皮短杆菌反接到敏感品系体内,胃毒法测试它的抗性也提升到了46.695μg/m L。3.联苯菊酯处理对茶尺蠖肠道细菌的影响比较了抗性和敏感品系茶尺蠖肠道菌群结构。通过测序对于茶尺蠖肠道菌群结构分析得到,敏感品系的优势菌门为厚壁菌门Firmicutes(12.01±4.88%)、变形菌门Proteobacteria(65.93±7.83%)、拟杆菌门Bacteroidetes(5.88±4.35%)以及蓝细菌门Cyanobacteria(14.90±7.15%),而抗性品系为厚壁菌门Firmicutes(98.10±0.08%)、变形菌门Proteobacteria(1.26±0.02%);在属的水平上,敏感品系肠道细菌丰度前五是肠球菌属Enterococcus(9.88±4.17%)、沃尔巴克氏菌属Wolbachia(36.69±17.60%)、蓝细菌属Cyanobacteria(14.89±7.16%)、不动杆菌属Acinetobacter(14.56±13.62%)、薄层菌属Hymenobacter(5.38±4.41%),抗性品系为肠球菌属Enterococcus(94.89±0.10%)、沃尔巴克氏菌属Wolbachia(0.61±0.03%)、蓝细菌属Cyanobacteria(0.40±0.10%)、不动杆菌属Acinetobacter(0.20±0.01%)、薄层菌属Hymenobacter(0.05±0.01%)。敏感品系的肠道菌群丰富度和多样性要高于抗性品系。
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