桑枝降糖活性成分及协同作用研究

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糖尿病是一种危害人类健康的常见和多发病,随着人类生存环境和生活方式的改变,糖尿病患者的数量在世界范围内急剧增长,糖尿病已成为继心血.管病、肿瘤之后的第三大病种,成为危害21世纪人类健康的杀手。如何防治糖尿病是世界范围内的重大研究课题,研发治疗糖尿病的药物受到人类高度重视。目前临床治疗糖尿病主要依靠注射各种胰岛素和口服降糖药物,但其会产生很多副作用,而且治疗费用很高,给人们带来了沉重的经济负担。我国糖尿病的中医药治疗有着悠久的历史,治疗效果显著。所以从传统中药中研发高效、毒副作用小的降糖药物己成为一个热点课题。桑科植物forus alba L桑枝(Ramulus Moki)被认为是治疗糖尿病的传统常用中药。现代研究表明,桑枝具有降脂、降压、增加机体耐力、抗衰老、降低胆固醇、抑制血栓形成,抑制肠内有害细菌繁殖,抑制有害氧化物形成,抑制癌症以及调节肾上腺素功能等功效,但最突出的功能是缓解糖尿病。本论文以α-葡萄糖苷酶为体外研究靶点,以正常小鼠链佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠为体内研究对象,探求桑枝水提物降糖活性,研究的主要内容有:(1)本研究以a-葡萄糖苷酶为靶点筛选桑树不同部位水提物(桑叶、桑枝、桑白皮)中活性高的部位,结果显示三者对α-葡萄糖苷酶活性均有较好的抑制作用。比较其中,桑白皮的抑制率最高(IC50=0.27mg/mL),桑枝次之,桑叶稍差。在前期的动物预实验中,三者也都能降低小鼠(正常和糖尿病)餐后血糖水平。结合其他因素,如桑枝到每年的11月份都会被大量打掉,使得桑枝资源丰富,相比桑白皮似乎更容易在生产上实现规模化。所以采用了桑枝作为实验室研究原材料。(2)本研究建立了实验室水平的桑枝总生物碱,总多糖,总黄酮的提取工艺,以α-葡萄糖苷酶为靶点从桑枝生药中利用大孔树脂交换、阳离子交换树脂吸附、醇沉、硅胶吸附及重结晶等方法制备了三种不同组分的提取物及其单体,利用化学分析法对这三种提取物的主要化学成分进行了分析,得出三种组分主要分别是生物碱,多糖和黄酮。(3)从桑枝水提物中制备的三种活性组分及其代表性单体化合物(多糖、DNJ、芦丁)在体外检测了对a-葡萄糖苷酶的作用,得出其对酶活性的抑制能力为生物碱(DNJ)>黄酮(芦丁)>多糖类(多糖),尤其是DNJ对α-葡萄糖苷酶的抑制活性很强,而多糖则显示很弱的酶抑制活性。各组单体化合物在体内水平均可降低正常小鼠的餐后血糖水平,延缓血糖高峰的时间。在给药30min后,给药组与空白对照组相比,血糖值有显著差异(P<0.05或P<0.01);研究单体化合物对实验性糖尿病小鼠的餐后血糖水平影响时,给药组与空白对照组相比,餐后血糖值以DNJ组极显著下降(P<0.01),芦丁和多糖组也有显著差异(P<0.05)。(4)桑枝中主要降糖活性成分DNJ与芦丁及多糖类单体组成的复方混合物在体外酶学水平实验中,对a-葡萄糖苷酶的抑制效果均优于单独组分。在正常小鼠和实验性糖尿病小鼠的糖耐量实验中,给药30min后复方组与单体DNJ组相比,血糖值有显著差异(P<0.05)。证明DNJ与芦丁和多糖类物质配伍有良好的协同作用。
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