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本文建立并验证了Caco-2细胞模型,利用Caco-2细胞模型研究小柴胡汤的体外吸收动力学和毒性,探讨小柴胡汤有效成分的吸收机制。1.小柴胡汤提取物(EXCHT)有效成分的含量测定：为了同时测定小柴胡汤中五个有效成分的含量,本文首先建立了小柴胡汤中有效成分的高效液相(HPLC)测定方法。色谱条件为：色谱柱Symmetry ShieldTM RP18 (5.0μm, 4.6mm×250mm Column);流动相为乙腈-0.01%磷酸溶液梯度洗脱；流速为0.45ml／min；检测波长为25 1nm和275nm；柱温为30℃。结果显示本方法的准确度、精密度、重现性、专属性和定量线性范围均符合要求,该方法简便快速、准确可靠,能同时测定小柴胡汤中黄芩苷(BCN)、汉黄芩苷(WGS)、黄芩素(BCE)、汉黄芩素(WGN)和甘草酸(GA)的含量,为小柴胡汤的吸收动力学研究奠定了基础。2. Caco-2细胞模型的建立和验证：Caco-2细胞接种于Millicell插入式培养皿中按标准培养21天,通过透射电镜和倒置显微镜观察Caco-2细胞单层细胞形态,并通过测定跨Caco-2细胞单层细胞膜电阻(TEER)和荧光素钠通透率评价Caco-2细胞模型的完整性和紧密性。结果发现Caco-2细胞单层形态与小肠上皮细胞类似,建立的Caco-2细胞模型完整性和紧密性良好,各项指标的测定值与参考文献值一致,可以作为研究药物小肠转运过程的体外模型。3. EXCHT对Caco-2细胞单层毒性研究：利用噻唑蓝(MTT)实验,测定给药前后TEER值、荧光素钠通透率和P-糖蛋白(P-gp)活性变化来研究小柴胡汤对肠道上皮Caco-2细胞的毒性作用。MTT实验结果显示700μg/ml以下的EXCHT对Caco-2细胞没有毒性作用。药物转运试验EXCHT的浓度为600μg／ml,结果显示该浓度下EXCHT对细胞单层的完整性和紧密性没有明显影响,但是对P-gp的活性却有一定的抑制作用。4. EXCHT中5种化学成分Caco-2细胞单层转运和摄取研究：利用Caco-2细胞单层模型研究EXCHT的双向转运和双向摄取情况,考察时间对EXCHT吸收的影响。双向转运结果显示WGS和WGN由AP侧到BL侧的Papp值分别为(1.23±0.09)×10-6和(1.07±0.89)×10-5,由BL侧到AP侧的Papp值分别为(2.12±0.19)×10-6和(7.12±1.02)×10-6,WGS和WGN属于吸收良好的化合物,BCN、BCE和GA不能透过Caco-2细胞单层,属于吸收不良的化合物。双向摄取实验结果显示BCN、WGS、BCE、WGN和GA都能被Caco-2细胞摄取,BCN和WGS的在Caco-2细胞上的摄取存在外排作用。LC/MS测定结果显示BCN、WGS、BCE和WGN的代谢产物可能有其磺酸结合物和葡萄糖醛酸结合物。本课题研究对揭示小柴胡汤药效物质基础和毒性研究奠定了一定的基础。