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血吸虫病是免疫性疾病,血吸虫性别特异分化、生殖产卵等阶段对其生存传播有重要影响。本课题组前期筛选出几十个可能与日本血吸虫免疫、性别及生殖相关的蛋白,作为日本血吸虫诊断抗原与疫苗的候选靶标。本研究针对其中的SjTollip(AY814053, AAW25785.1)和SjSSX(BU793503, CAX76185.1)2个蛋白进行研究。主要研究内容包括：(1)根据序列信息进行以下生物信息学分析：预测信号肽、预测跨膜区域、预测功能位点和结构域、同源序列搜索、多序列比对以及构建进化树等；(2)基因的克隆、原核表达以及重组蛋白的纯化；(3)重组蛋白免疫原性检测,制备重组蛋白兔多克隆抗体并评价,考察基因的虫期转录特异性和蛋白的虫期表达特异性；(4)蛋白质的诊断价值评价和动物保护性实验。Tollip是TLRs信号通路中的负性调节因子,它能够抑制过度和长时间的免疫反应。SjTollip为相对保守蛋白,在多个物种中有同源序列。构建了pET-28a/SjTollip重组质粒,诱导表达获得不可溶蛋白,通过尿素纯化获得较高浓度和纯度的重组蛋白；Western blot检测显示SjTollip具有一定的免疫原性；SjTollip免疫兔多克隆抗体的滴度达到1：256,000；SjTollip在毛蚴、胞蚴、虫卵、童虫、雌虫中转录水平高,尾蚴和雄虫中转录水平低；SjTollip主要在童虫和雌虫中表达,与基因转录一致；rSjTollip作为包被抗原通过ELISA方法检测不同人群血清,敏感性和特异性分别为70%和80%；用rSjTollip免疫小鼠诱导产生58.05%的减虫率,感染后40d-42d粪便减卵率为59.84%,43d～45d粪便减卵率为78.68%。说明其能够诱导产生较强的免疫保护力,是潜在的疫苗候选靶标。SSX蛋白是CT抗原家族成员,CT抗原的异位表达可以导致自体统一细胞或体液产生免疫应答,可用于构建和发展免疫治疗方案,作为免疫治疗的靶点。SjSSX与日本血吸虫重要宿主中的同源序列的相似性较低,构建了pET-28a/SjSSX重组质粒,诱导表达获得不可溶蛋白,通过尿素纯化获得较高浓度和纯度的重组蛋白；Western blot检测显示SjSSX具有良好的免疫原性；SjSSX免疫兔多克隆抗体的滴度达到1：256,000;SjSSX在童虫、雌虫中转录水平高,胞蚴、虫卵次之,毛蚴、尾蚴和雄虫中转录水平低；SjSSX在虫卵、尾蚴、童虫、雄虫、雌虫均有表达；SjSSX作为包被抗原通过ELISA方法检测不同人群血清,敏感度为80%,特异度为90%；用SjSSX免疫小鼠可诱导产生28.16%的减虫率,感染后43d-45d粪便减卵率为4.25%。