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OVA66是本实验室应用重组cDNA表达文库血清学分析(SerologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibrary,SEREX)方法从人卵巢癌cDNA文库筛选得到的一个新的卵巢癌相关基因，其编码蛋白被证明是一种新的肿瘤相关抗原，但其生物学功能及作用机制尚不明确。本研究拟在前期工作的基础上，进一步探索OVA66基因及其编码蛋白的致瘤性及在肿瘤发生和发展过程中的作用机制。论文由以下三部分工作组成。 第一部分:抗OVA66单克隆抗体的制备及其特性研究 由于OVA66系我们实验室首次发现，目前市场上尚无商业化的相关抗体出售，因此给我们进一步的研究工作，包括细胞定位、蛋白检测等造成不便。为此，本部分实验首先从两株稳定分泌OVA66抗体的杂交瘤细胞中制备、纯化和鉴定了两种抗OVA66单抗5F4和4G9，证实均具有较高效价和特异性，为第二和第三部分研究奠定了基础。 第二部分:OVA66的致瘤性及其参与肿瘤发生发展的可能机制 第一章转染OVA66基因的NIH3T3细胞体内成瘤实验 将构建的真核表达载体pFLAG-OVA66转染至低表达OVA66基因的无致瘤性小鼠成纤维细胞NIH3T3中，经G418筛选，获得稳定表达株NIH3T3OVA66。然后将此稳定高表达OVA66基因的NIH3T3细胞株，在裸鼠体内构建实体瘤模型。经免疫组化和活体荧光成像实验等方法检测，移植瘤表达OVA66，证明构建成功;同时在成瘤小鼠肺部组织亦检测到OVA66蛋白表达。从功能上证实OVA66是一种具有致瘤能力的肿瘤相关基因，它与体内肿瘤的发生和迁移密切相关。 第二章NIH3T3OVA66细胞体内成瘤机制探讨 通过微量吸管黏附频率试验计算黏附频率、免疫组化方法检测成瘤小鼠肿瘤组织及肾癌患者肿瘤和癌旁组织中OVA66、Arg-1和COX2的表达水平，并从NIH3T3Mock和NIH3T3OVA66细胞中定位检测XTP3TPA蛋白几个方面，对NIH3T3OVA66细胞在裸鼠体内成瘤机制进行了探讨。结果发现，NIH3T3OVA66细胞与肿瘤小鼠的巨噬细胞黏附能力显著高于其他组，而NIH3T3Mock细胞与肿瘤和非肿瘤来源巨噬细胞的黏附能力无明显差异，而两种NIH3T3细胞与肿瘤来源的巨噬细胞的黏附能力总体上大于它们与正常巨噬细胞的黏附能力。小鼠肿瘤组织中OVA66蛋白表达增高，肾癌患者肿瘤组织的OVA66、Arg-1和COX2表达水平均显著高于癌旁组织(P＜0.001);但肿瘤组织中OVA66的表达与Arg-1和COX2的表达未见明显相关性(P＞0.05);在NIH3T3OVA66和NIH3T3Mock两种细胞的胞浆中均可检测到XTP3TPA蛋白表达，但只在NIH3T3OVA66细胞的细胞核中该蛋白表达明显增高。提示两点:(1)OVA66可能是通过改变细胞表面粘附分子的表达，从而影响其与肿瘤间质细胞的相互作用;但这种作用可能并不涉及Arg-1和COX2的表达。(2)OVA66的致瘤作用可能与其诱导XTP3TPA蛋白向细胞核富集有关。 第三部分:XTP3TPA在肿瘤组织中表达谱比较分析 XTP3TPA是新近发现的一种未知功能的基因。OVA66能够诱导XTP3TPA蛋白向细胞核富集促使我们进一步分析XTP3TPA与肿瘤发生间的关系。通过免疫组化法我们检测了6种类型的人体肿瘤组织和正常组织中XTP3TPA的表达量及其蛋白定位。结果发现，XTP3TPA在正常（癌旁）组织细胞中的表达水平很弱，且主要集中在胞浆中。而在癌组织细胞中，除了在细胞浆中表达外，XTP3TPA在细胞核中的表达量明显增加，在多种肿瘤细胞中呈现XTP3TPA在细胞核内富集的现象。结合第二部分的研究结果，我们推测，OVA66可能通过诱导XTP3TPA在核内富集，提高肿瘤细胞中核酸掺入的效率准确性，有效控制胞内异常核苷酸的浓度，促进肿瘤细胞的快速生长和增殖。