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缺血性心脏病(IHD)已经成为西方国家人口死亡的重要原因,在我国已经上升至人口死亡原因的第二位,因此了解该病的发病过程对IHD的治疗及预防有重要意义。IHD诱发的心肌损伤的神经调控一直聚焦于交感神经与副交感神经的对抗作用。近年来,辣椒素敏感的神经作为二元神经(既有传入神经功能,又有传出神经功能)及其主要递质P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)在IHD的作用越来越受重视,但其确切的作用尚无定论。目的：本研究通过辣椒素对辣椒素敏感神经的神经毒作用制作乳鼠辣椒素去神经模型,观察其急性心肌缺血(AMI)诱发的的心肌损伤的变化,探讨辣椒素敏感的感觉神经及其神经肽SP、CGRP对急性心肌缺血诱发的心肌损伤的作用及其机制。方法：本实验分四部分进行研究。1.以新生48小时SD雄性大鼠随机分为去辣椒素敏感的感觉神经组(D),正常大鼠组(N),以辣椒素50mg／kg皮下注射制作去辣椒素敏感新神经模型。8-12周后进行热刺激甩尾潜伏期时间测定以及通过IHC和ELAS法检测背根神经节(DRG)和心肌组织SP与CGRP的表达与含量。2.以正常SD大鼠为对照,检测去辣椒素敏感神经大鼠在冠状动脉结扎(coronary artery occlusion, CAO)引起的急性心肌缺血过程中,辣椒素敏感的神经肽SP与CGRP在DRG和缺血心肌组织的蛋白和mRNA的改变。本部分实验分为去辣椒素敏感神经组(D)和正常大鼠组(N),每组又分为假手术组(SHAM)和冠脉结扎组(CAO),根据CAO时间不同又分为3H组和6H组,每组动物6例。实验方法包括冠状动脉结扎模型制作,通过IHC,ELASA检测各时点DRG和缺血心肌SP与CGRP含量,通过实时定量Rt-PCR检测各时点DRG和缺血心肌SPmRNA与CGRP-amRNA和CGRP-βmRNA的表达。3.以正常SD大鼠为对照组,以心肌缺血区梗死面积(AI/AAR, AAR/LV, TTC法),外周血肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)浓度,缺血区心肌细胞凋亡阳性率(TUNEL法)和缺血区心肌组织Capase-3活性为检测指标,检测去辣椒素敏感的感觉神经在CAO引起的急性心肌缺血过程中心肌损伤的程度。实验分组同2.4.以正常SD大鼠和去辣椒素敏感的感觉神经大鼠为对照,检测经SP受体拮抗剂(D-SP)或CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37)预处理SD大鼠在CAO引起的急性心肌缺血后3H心肌缺血区梗死面积(TTC法)的变化。预处理是在CAO前15 min经大鼠尾静脉注射D-SP10-6mmol／l／kg或CGRP8-37 10-6mmol／l／kg,每组动物6例。结果1.①热刺激甩尾潜伏期时间：去辣椒素敏感的感觉神经大鼠(D)明显延长(n=6,P<0.001)②脊髓和DRG SP与CGRP IHC示：D组在脊髓背角和DRG SP与CGRP免疫阳性表达明显减弱。③ELASA结果：D组SP在DRG下降7%(n=6),左室心肌组织下降23%(n=6,P<0.01)。CGRP在DRG减少63%(n=6,P<0.01),左室心肌组织CGRP减少59%(n=6,P<0.01)2.①IHC：缺血心肌组织：SP与CGRP免疫阳性表达主要位于心外膜于心内膜,其阳性神经是环绕心肌纤维。在心肌血管内皮表达较强。CAO后表达增强。与正常大鼠相比较,D-CAO组表达弱。DRG:CGRP与SP免疫阳性表达CAO后有所增强,但D-组与N-组相比较,表达弱。CGRP更明显。②ELASA:缺血心肌组织：SP在3h组,CAO后两组心肌含量增加,D组比N-组减少(n=6,P<0.01)。6h组与3H组相比较,各组SP含量均下调(n=6,P<0.01)。各组间无差异(P>0.05)。CGRP心肌含量在CAO后每组均有上调,并有统计学差异(P<0.05),D-组在缺血3h明显比N-组减少(p<0.01),但在心肌缺血6h后,两组间差异减小。DRG:SP去辣椒素敏感神经组,DRG SP含量高于正常大鼠(P<0.05)。CAO3H后两组均有上调。CAO6h正常大鼠出现上调P<0.05),去神经大鼠未出现上调(P>0.05)。CGRPD-组比N-组含量低(p<0.01),心肌缺血6H后N-组明显上调(p<0.01),而D-组却无明显变化。反映DRG水平,去辣椒素敏感神经大鼠对AMI的神经肽调节减弱。③Rt-PCR:缺血心肌组织,SPmRNA各组CAO后表达均上调,并与CAO时间成正相关。D-组表达明显高于N-组(n=6,p<0.01)。CGRPamRNA和CGRPβmRNA组虽然D-组表达明显高于N-组(p<0.01),但D组在CAO后3h表达下调(P<0.05),CAO6h才出现上调(P<0.05)。DRG：SPmRNA组CAO后表达均上调,并与CAO时间成正相关,但去辣椒素敏感性神经组(D-组)SPmRNA明显低于N-组(P<0.01)。CGRPαmRNA和CGRPβmRNA组虽然D-组表达明显低于N-组(p<0.01)。但CAO后,N-CAO组上调(p<0.01),D-CAO组下调(P.0.01)。随CAO时间延长,各6h组均比3h组表达上调(p<0.01)。3.①AI/AARD-组与N-组比较在CAO6h明显增加(p<0.01)。各组间AAR/LV无明显差异。②外周血清cTnI,D-组在CAO6h明显高于N-组。(p<0.01)③D组缺血区心肌细胞凋亡阳性率明显高于N-组。并随CAO时间延长增加。(p<0.01)。D组Capase-3活性高于N组,尤其在CAO6h后D组Capase-3活性明显高于N-组(P<0.05)。4.四组CAO3h缺血区心肌AAR/LV无明显差异(n=6,P>0.05),CGRP8-37组AI/AAR明显大于N-CAO3h组(n=6,p<0.01),与D-CAO3h组无统计学差异(n=6,P>0.05)。D-SP组与N-CAO3h相比,AI/AAR有增加趋势,无统计学差异(n=6,p>0.05)。与D-CAO组和CGRP8-37组无明显统计学差异(n=6,P>0.05)结论1.乳鼠辣椒素去神经后DRG与心肌组织CGRP与SP含量较少,以CGRP为主。抗伤害刺激能力减弱。2.AMI后,SP与CGRP在DRG与心肌组织的变化,反映其参与AMI的神经调控。去辣椒素敏感神经大鼠对AMI的神经反应性仍存在,但明显滞后。去辣椒素敏感神经大鼠CAO后,SP、CGRP在心肌与DRG含量变化与AMI诱发的心肌损伤有关。3.去辣椒素敏感感觉神经大鼠加重AMI诱发的心肌损伤。心肌细胞凋亡机制可能参与去感觉神经对AMI诱发心肌损伤加剧的病理学过程。4. CGRP8-37和D-SP预处理可增加CAO梗死面积。加重心肌损伤。说明内源性CGRP和SP对AMI诱发的心肌损伤有保护作用。