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分子生物学、基因工程技术等生命科学学科的不断进步,使得药用昆虫的研究得以深入到分子水平。本论文开展了红光熊蜂蜂毒磷脂酶A2 (Bi-PLA2)基因的分子克隆、鉴定和功能研究。磷脂酶A2是蜂毒的一种主要成分,本研究即为鉴定红光熊蜂蜂毒中的磷脂酶A2。首先,通过红光熊蜂毒腺的表达序列标签(ESTs)筛选到了目标基因,用RACE-PCR和RT-PCR技术,成功克隆了Bi-PLA2基因。推测蛋白的分子量为15.6kDa。通过对比Bi-PLA2基因的基因组序列和cDNA序列,结果显示Bi-PLA2基因含有4个外显子和3个内含子。搜索GeneBank数据库,Bi-PLA2基因的基因组序列序列均未见报道,两者均属首次cDNA报道的基因序列,因此,按新的基因序列在登录,GeneBank的Bi-PLA2序列和基cDNA因组序列的登录号分别为FJ768907和FJ768908。是分子量大小为18kDa的糖蛋白。Bi-PLA2和Northern Blotting的分析Western Blotting结果表明在毒腺中表达,在Arg(44)和Ile(45)处发生断裂,然后储存在毒囊Bi-PLA2中。通过对比分析结果显示,成熟的蛋白与其它蜜蜂的PLA2一样,含有10个半Bi-PLA2胱氨酸残基并且有高度保守的Ca2+结合位点和活性位点。PLA2蛋白的同源性分析将熊蜂和蜜蜂分成了两个组。本研究利用分离纯化了FPLC实现了红光熊蜂蜂毒磷脂酶A2的首次分离。Bi-PLA2,用已知的PLA2的水解特异性底物对其进行分析,随着加入DBPC量的增加,Bi-PLA2水解产生的荧光也增强,结果表明荧光的增强依赖于DBPC最后,用以Bi-PLA2.处理过的sf9细胞进行免疫荧光染色测定,由研究结果推测Bi-PLA2可能与细胞膜结合,Bi-PLA2水解细胞膜上的磷脂,从而引起细胞的凋亡。此反应的作用机制目前尚未清楚,有待于更深入的研究。