一种新型生发液的安全性及生发作用研究

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目的:通过家兔皮肤刺激性实验、小鼠皮肤过敏性实验和家兔急性眼刺激实验初步评价新型生发液的安全性。通过石蜡和松香小鼠脱毛模型,脂溢性脱发小鼠模型,以及人永生化表皮细胞(Ha Cat细胞)存活率实验,探讨新型生发液的生发作用及机制。方法:1.参照2021年《化妆品安全技术规范》指导原则,通过家兔皮肤刺激性实验、小鼠皮肤过敏性实验、家兔急性眼刺激实验,初步评价新型生发液的安全性。2.用石蜡和松香(1:1)建立小鼠脱毛模型,观察生发液对小鼠的新生毛发生长积分、毛长和毛重、病理组织、毛囊数量,初步评价生发液对小鼠毛发生长有促进作用。3.小鼠皮下注射丙酸睾酮,建立脂溢性脱发小鼠模型;观察生发液对脂溢性脱发小鼠的新生毛发生长积分、毛长和毛重、病理组织、毛囊数量,以及对血清中的睾酮(T)、雌二醇(E2)和肝细胞生长因子(HGF)的影响,评价生发液对脂溢性脱发小鼠毛发生长的促进作用。4.体外培养人永生化表皮细胞(Ha Cat细胞),用CCK-8法检测细胞的增值,在给药24h、48、72h时,测定在450nm处的OD值,计算Ha Cat细胞的存活率。结果:1.家兔皮肤刺激性实验中,在涂抹生发液之后的家兔未出现异常情况,且无水肿和红斑等刺激性现象出现,提示生发液无剌激性;小鼠过敏性实验中,药物组和空白组的小鼠皮肤均没有出现过敏现象,也未出现休克等其他过敏症状,提示生发液无致敏性。家兔急性眼刺激实验中,家兔眼角膜、虹膜和结膜的剌激分值之和为0,提示生发液无严重眼剌激性。2.对小鼠新生毛发生长情况的评价,与模型组比较,生发液高、中、低三个剂量组的小鼠新生毛发重量以及长度都在增加,并且具有显著或极显著性差异(p<0.05,p<0.01);生发液对小鼠毛囊的影响,与模型组相比,生发液低剂量组毛囊数量有所增加,毛囊发育略有改善,生发液中剂量组毛囊数量明显增多,毛囊排列较为紧密,毛囊生长明显改善;生发液高剂量组相比其他组,毛囊数量最多,排列紧密,且主要处于生长期,提示毛囊发育相对最好;对小鼠终毛,毳毛的影响,与模型组比较,生发液三个剂量组的毛囊总数量增多,终毛数量明显增多,毳毛数量降低,生发液各剂量组终毛/毳毛比值都升高。3.在皮下注射丙酸睾酮的小鼠脂溢性脱发实验中,与模型组比较,生发液高剂量组、生发液中剂量组、生发液低剂量组的血清T水平显著降低(p<0.05),生发液高剂量组、中剂量组雌二醇E2水平和HGF水平显著升高(p<0.05),低剂量组的雌二醇E2水平和HGF水平无显著性差异;4.在Ha Cat细胞增值实验中,与正常对照组比较,给药24h后,生发液的各个浓度组的存活率都在100%以上;随着稀释倍数的增加,存活率下降,细胞增殖呈现出剂量依赖趋势。在给药的24h、48h、72h后,随时间的延长细胞存活率随之增加,在72h时,各个浓度下的细胞存活率分别达到136.6%、121.2%、118.5%、102.5%、101.1%,其细胞增殖呈现时间依赖趋势。结论:1.生发液对家兔皮肤和眼睛无刺激作用,生发液对小鼠皮肤无致敏作用,生发液具有较好的安全性。2.生发液可以显著提高脱毛小鼠毛发生长平均积分、平均毛重量及平均毛长,显著增加毛囊数量,对毛发生长有促进作用。3.生发液能降低血清睾酮T水平,升高血清雌二醇E2和HGF水平,有明显促进脂溢性脱发小鼠的毛发生长;生发液能明显促进Ha Cat细胞的增值。4.生发液具有较高的安全性,生发液具有较好的促进脱发小鼠毛发生长作用,其机制可能与其调节雄性激素和生长因子,促进Ha Cat细胞的增值有关。
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