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MAD2是一种纺锤体组装检验点蛋白，其功能是检测染色体动粒与纺锤体微管的连接进而控制有丝分裂的运行。本课题组前期研究发现在模拟微重力条件下培养的人骨肉瘤细胞中MAD2升高、纺锤体多极率上升、细胞周期发生阻滞。 为了进一步研究MAD2的功能，本课题应用RNAi技术特异性沉默MAD2表达。首先，利用构建的四种pSilencer4.1-MAD2-shRNA真核表达重组体转染人骨肉瘤细胞系MG-63和U-2 OS。Western blot检测MAD2的表达情况，发现转染MAD2-shRNA-1和MAD2-shRNA-3重组体的细胞具有明显的沉默效果。观察地基条件下MAD2沉默后细胞增殖的改变，细胞生长曲线的测定结果表明，与对照组相比MAD2沉默后，人骨肉瘤细胞系MG-63和U-2 OS细胞生长均受到抑制。此外，利用流式细胞术检测细胞周期变化情况，结果显示与对照组相比 MAD2沉默后，U-2 OS中G2/M期的细胞比例明显减少，S期的细胞比例增加，而MG-63的细胞周期无明显变化。同时DNA含量分析结果表明在MAD2沉默的U-2OS中多倍体细胞发生率明显降低，而MG-63中多倍体细胞发生率并无明显变化。 在此基础上，为了探讨模拟微重力效应对MAD2沉默后细胞增殖的影响，将封闭MAD2效果最好的重组体MAD2-shRNA1转染MG-63和U-2OS细胞，利用回转仪模拟微重力效应培养24h、48h和72h后，分析细胞周期和多倍体细胞发生率的变化情况。结果表明随着模拟微重力培养时间的延长，MG-63中G2/M期细胞比例有显著的上升趋势，但多倍体细胞发生率无明显变化；而在U-2 OS中，G2/M期的细胞比例无明显变化，S期细胞比例上升趋势变缓，多倍体细胞发生率明显上升。 综上所述，模拟微重力效应对MAD2沉默后的细胞周期、多倍体细胞发生率均有一定的影响，本研究将为进一步深入开展MAD2功能研究奠定基础，同时也为模拟微重力效应影响引起纺锤体多极与细胞周期阻滞发生的机理研究提供数据支持。