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第一部分超声微泡造影剂联合survivin反义寡核苷酸对CHG-5细胞survivin蛋白表达的影响目的:探讨超声微泡造影剂﹙Ultrasound microbubble,UM﹚联合survivin反义寡核苷酸﹙ASODN﹚对人胶质瘤细胞系CHG-5 survivin mRNA及蛋白表达的抑制作用。方法:针对survivin基因序列设计合成survivin反义寡核苷酸,将实验分为五组。A组:Survivin反义寡核苷酸并超声微泡造影剂联合超声﹙Ultrasound,U﹚照射﹙ASODN+UM+U﹚;B组:Survivin反义寡核苷酸并脂质体﹙lipofectaminTM2000﹚转染联合超声照射﹙ASODN+lipo+U﹚;C组:Survivin反义寡核苷酸并脂质体转染﹙ASODN+lipo﹚;D组:Survivin反义寡核苷酸并超声微泡造影剂转染﹙ASODN+UM﹚;E组:空白对照组﹙Control﹚。利用RT-PCR检测survivin mRNA表达的变化,利用免疫细胞化学、激光共聚焦及Western blotting检测survivin蛋白的表达变化。结果:RT-PCR结果显示:A组survivin mRNA的抑制率为67.76﹪,B组和C组分别为48.70﹪和44.03﹪,A组明显高于B组和C组(P<0.05),三者与空白对照组比较差异均具有显著性(P<0.05)。D组抑制率为3.84﹪,与空白对照组比较差异不具有显著性(P >0.05)。免疫细胞化学、激光共聚焦及Western blotting检测各组细胞survivin蛋白的表达,Survivin反义寡核苷酸经超声微泡造影剂联合超声照射转染以及经脂质体转染后,survivin蛋白的表达均下调,以A组下调最明显(P<0.05),三者与空白对照组比较差异均具有显著性(P<0.05)。D组与空白对照组比较差异不具有显著性(P >0.05)。这与survivin mRNA的表达变化一致。结论:Survivin反义寡核苷酸序列较特异,转染后能够降低survivin mRNA以及survivin蛋白的表达,但以survivin ASODN并超声微泡造影剂联合超声照射组降低最明显,超声微泡造影剂介导的survivin反义寡核苷酸转染是一种无创、新型、高效的基因转染方法。第二部分超声微泡造影剂联合survivin反义寡核苷酸对CHG-5增殖和凋亡的影响目的:探讨超声微泡造影剂联合survivin反义寡核苷酸对人胶质瘤细胞株CHG-5增殖和凋亡的影响。方法:针对survivin基因序列设计合成survivin反义寡核苷酸,将实验分为五组。A组:Survivin反义寡核苷酸(ASODN)并超声微泡造影剂联合超声照射﹙ASODN+UM+U﹚;B组:Survivin反义寡核苷酸并脂质体转染联合超声照射﹙ASODN+lipo+U﹚;C组:Survivin反义寡核苷酸并脂质体转染﹙ASODN+lipo﹚;D组:Survivin反义寡核苷酸并超声微泡造影剂转染﹙ASODN+UM﹚;E组:空白对照组﹙Control﹚。利用MTT法检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率的变化。结果:﹙1﹚在同一实验组,随着时间的增加,24h,48h,72h各组细胞生长抑制率均表现出递增的趋势,以72h的抑制率最大。在同一时间点,B组和C组比较细胞增殖抑制率无显著性差异(P﹥0.05),D组与空白对照组比较,差异没有显著性意义,而A组与其余各组比较,差异均具有显著性意义(P﹤0.05)。﹙2﹚流式细胞术检测结果,A组细胞凋亡率为(54.97±1.89)﹪,与B组细胞凋亡率(35.58±3.51)﹪及C组(33.74±1.77)﹪比较差异均具有显著性意义(P﹤0.05),三者与空白对照组(6.34±0.16)﹪比较差异也均具有显著性意义, D组(7.76±1.08)﹪与空白对照组比较差异没有显著性意义(P﹥0.05)。结论:survivin ASODN并超声微泡造影剂联合超声照射能明显抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡。