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胃癌是常见的恶性肿瘤,在我国胃癌呈现早期诊断率低,死亡率高的特点。目前新的化疗药物的出现使病人在生存时间和生活质量上得到更多的获益,但多药耐药(multidrug resistance, MDR)的产生仍然是制约胃癌化疗疗效的主要问题。筛选并鉴定新的胃癌耐药相关基因,探讨其在胃癌耐药中的可能机制,具有重要的意义。本实验首先通过化疗药物顺铂0.02-1.0ug/ml浓度梯度递增诱导胃癌SGC7901细胞株,通过电镜观察肿瘤细胞的形态学改变,MTT法检测肿瘤细胞多药耐药性,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR和Westren blot技术在基因和蛋白水平检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,成功建立对顺铂稳定耐药并具有MDR表型的的胃癌SGC7901/DDP细胞株。利用基因芯片Affemetrix U133 plus2.0对敏感细胞株SGC7901和耐药细胞株SGC7901/DDP进行基因差异筛选,发现在细胞信号传导通路中具有重要意义的基因Notch1(Notch homologue 1)在耐药株中明显上调,应用Notch1的抑制剂阻滞Notch1表达后,通过MTT发现耐药细胞株的耐药性明显降低,其下游的NF-κB和P-gp在基因和蛋白水平明显降低,流式细胞检测细胞凋亡增加。构建了含有168例胃癌病人手术标本和27例正常胃组织的组织芯片,利用免疫组化方法检测Notch1,NF-κB和P-gp的表达,证实Notch1,NF-κB和P-gp在胃癌中表达明显高于正常胃组织。Notch1与肿瘤大小,分化程度,浸润深度,脉管浸润显著相关,NF-κB与肿瘤大小,分化程度,浸润深度,脉管浸润和远处转移显著相关。Notch1和NF-κB,P-gp呈显著正相关。Kaplan-Meier分析显示Notch1,NF-κB,P-gp阳性组的预后较阴性组差。COX回归多因素分析显示Notch1是影响胃癌预后的独立因素之一。本研究利用基因芯片的高通量筛选得到了大量有意义的多药耐药相关基因,证实作为细胞信号通路中的重要蛋白Notch1,可能通过NF-κB途径参与胃癌多药耐药性的产生,并可成为未来胃癌治疗的靶点。