【摘 要】
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纤溶酶原激活物抑制物-1（Plasminogen Activator Inhibotor-1,PAI-1）是一种可形成纤维蛋白凝块的特异性溶解抑制剂,在细胞迁移、排卵、增殖、凋亡等过程中发挥重要作用。课题组前期经高通量测序发现PAI-1基因与宁乡猪肌肉生长发育存在一定相关性,在此基础上,本研究采集宁乡猪30、90、150和210日龄中猪背最长肌组织,利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测
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纤溶酶原激活物抑制物-1（Plasminogen Activator Inhibotor-1,PAI-1）是一种可形成纤维蛋白凝块的特异性溶解抑制剂,在细胞迁移、排卵、增殖、凋亡等过程中发挥重要作用。课题组前期经高通量测序发现PAI-1基因与宁乡猪肌肉生长发育存在一定相关性,在此基础上,本研究采集宁乡猪30、90、150和210日龄中猪背最长肌组织,利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测PAI-1基因的表达水平,再利用干扰和过表达等技术探究PAI-1基因对C2C12成肌细胞增殖、凋亡和分化的作用机制,以期将其运用到畜牧生产中提高猪瘦肉率。主要研究结果如下:（1）PAI-1基因在宁乡猪肌肉不同发育时期的表达规律PAI-1基因表达水平从30到90日龄显著下降（P<0.05）,90到150日龄极显著上升（P<0.01）,150到210日龄显著下降（P<0.05）,PAI-1基因表达水平整体呈先下降后上升再下降趋势。（2）干扰和过表达PAI-1基因对C2C12成肌细胞增殖和凋亡的影响CCK-8和EDU试剂盒检测细胞增殖,发现干扰PAI-1基因后细胞增殖率显著下降（P<0.05）;过表达PAI-1基因后细胞增殖率显著上升（P<0.05）。流式细胞技术检测细胞周期,发现干扰PAI-1基因后处于G1期的细胞比例较NC组显著上升（P<0.05）,处于G2期和S期的细胞总比例较NC组显著下降（P<0.05）;过表达PAI-1基因后处于G1期的细胞比例较NC组显著下降（P<0.05）,处于G2期和S期的细胞总比例较NC组显著上升（P<0.05）。流式细胞技术检测细胞凋亡,发现干扰PAI-1基因后,细胞凋亡率较NC组极显著上升（P<0.01）;过表达PAI-1基因后,细胞凋亡率较NC组极显著下降（P<0.01）。qRT-PCR检测凋亡相关基因表达,干扰PAI-1基因后,促进凋亡基因Bax和Caspase-3表达量显著上升（P<0.05）,抑制凋亡基因Bcl-2表达量极显著下降（P<0.01）;过表达PAI-1基因后,促进凋亡的基因Bax和Caspase-3表达量显著下降（P<0.05）,抑制凋亡的相关基因Bcl-2表达量极显著上升（P<0.01）。（3）干扰和过表达PAI-1基因对C2C12细胞成肌分化的影响将干扰与过表达PAI-1基因后的C2C12成肌细胞进行成肌分化0、2、4和6天。分别提取细胞总RNA,qRT-PCR检测PAI-1基因和成肌分化相关基因MyoG在细胞分化不同时期的表达量,发现MyoD、MyoG基因和PAI-1基因呈反向变化趋势。Western Blot结果也表明干扰PAI-1基因后,C2C12成肌细胞中MyoD的蛋白表达量较NC组极显著上升（P<0.01）,MyoG的蛋白表达量较NC组显著上升（P<0.05）,过表达PAI-1基因后,MyoG、MyoD的蛋白表达量较NC组极显著下降（P<0.01）。综上所述,PAI-1基因在宁乡猪肌肉不同发育时期呈先下降后上升后再下降趋势;干扰PAI-1基因会抑制C2C12成肌细胞的增殖并促进其凋亡;过表达PAI-1基因会促进C2C12成肌细胞的增殖并抑制其凋亡;干扰PAI-1基因会促进C2C12细胞成肌分化;过表达PAI-1基因会抑制C2C12细胞成肌分化。
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