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实验一:黄芪对人角质形成细胞增殖与黏附功能的影响目的:通过对黄芪影响人角质形成细胞的增殖与β-连环蛋白表达研究,探讨黄芪治疗银屑病的可能机制。方法:采用细胞计数法初步检测黄芪抑制HaCaT细胞增殖的有效浓度范围;采用CCK-8试剂盒检测不同浓度黄芪注射液对HaCaT细胞增殖功能的影响;采用qPCR法检测β-连环蛋白mRNA表达情况;运用Western-blot法检测β-连环蛋白的表达情况。结果:(1)HaCaT细胞经0、0.01、0.1、1、10、100mg/ml黄芪注射液孵育24h后,细胞计数结果显示,与对照组相比,黄芪在1mg/ml后对HaCaT细胞增殖的抑制效果明显;(2)根据细胞计数结果,得到抑制细胞增殖有效浓度大概范围为1-10mg/ml,实验组设置为0.5、1、2、4、8、16 mg/ml的黄芪处理24h组、48h组,通过CCK-8试剂盒检测结果显示,与对照组相比,HaCaT细胞经1mg/ml黄芪注射液处理24、48h时增殖抑制效果显著;(3)qPCR结果表明,与对照组相比,HaCaT细胞经1mg/ml黄芪注射液处理24、48h后,在48h时β-连环蛋白mRNA表达明显下降;(4)Western-blot检测结果显示,与对照组相比,HaCaT细胞经1mg/ml黄芪注射液处理48h时,β-连环蛋白表达明显下降。结论:黄芪治疗银屑病作用机制可能与抑制人角质形成细胞的增殖、抑制β-连环蛋白的表达有关。实验二:薄芝糖肽对人角质形成细胞增殖与黏附功能的影响目的:通过对薄芝糖肽影响人角质形成细胞的增殖与β-连环蛋白表达研究,探讨薄芝糖肽治疗银屑病的可能机制。方法:采用CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)初步检测薄芝糖肽抑制HaCaT细胞增殖的有效浓度范围;采用CCK-8试剂盒继续检测不同浓度薄芝糖肽注射液对HaCaT细胞增殖功能的影响;采用qPCR法检测β-连环蛋白mRNA表达情况;运用Western-blot法检测β-连环蛋白的表达情况。结果:(1)CCK-8试剂盒初步检测结果显示,与对照组相比,HaCaT细胞分别经0.011719、0.023438、0.046875、0.09375、0.1875、0.375、0.75、1.5mg/ml薄芝糖肽处理24h后,对HaCaT细胞增殖具有抑制作用,差异均具有统计学意义,且在0.023438mg/ml后抑制效果显著;0.011719、0.023438、0.046875、0.09375mg/ml薄芝糖肽处理48h后对HaCaT细胞增殖有抑制作用,差异均具有统计学意义;(2)根据CCK-8初步检测结果再次设置浓度梯度为0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80ug/ml,结果显示,与对照组相比,不同浓度薄芝糖肽注射液处理24、48h后,对HaCaT细胞增殖均有抑制作用,差异均具有统计学意义,且在20ug/ml处理48h后抑制效果最显著;(3)qPCR结果表明,与对照组相比,HaCaT细胞经10、20ug/ml薄芝糖肽注射液处理24、48h,β-连环蛋白mRNA表达均明显下降,且于48h效果最显著;(4)Western-blot检测结果显示,与对照组相比,HaCaT细胞经10ug/ml薄芝糖肽注射液处理24h时,β-连环蛋白表达明显下降。结论:薄芝糖肽治疗银屑病作用机制可能与抑制人角质形成细胞的增殖、抑制β-连环蛋白的表达有关。