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头颈部鳞状细胞癌在全球发病率很高。由于肿瘤常常发生了局部侵袭和转移患者的预后很差。进一步了解头颈部鳞癌侵袭和转移的生物学机制,有助于我们发现头颈部鳞癌不良预后的生物学标志。研究表明STAT3和EZH2在头颈部鳞癌中有着致癌作用,它们均能促进HNSCC的增殖进而影响肿瘤的进展,且STAT3和EZH2与HNSCC患者的预后呈负相关。我们想了解STAT3、EZH2在HNSCC的侵袭和转移过程中的机制,寻找潜在的治疗靶点。方法第一部分:以头颈部鳞癌细胞系SCC25和CAL27为对象,选择小分子抑制剂WP1066抑制STAT3、细胞因子IL-6促进STAT3的活化,EZH2 siRNA敲低EZH2表达进行实验。通过Western blot检测细胞内蛋白表达水平的变化,以q-PCR技术研究细胞内miR-200b/a/429的表达水平。以transwell实验、划痕实验验证细胞侵袭和迁移能力的改变。以细胞免疫荧光实验进一步了解细胞EMT相关蛋白的表达和形态上的改变。第二部分:Luciferase慢病毒感染头颈部鳞癌细胞系SCC25,以荧光强度判断成功与否,在小鼠口底建立原位模型。分别给予局部注射药物:DMSO、DZNep、WP1066、mimic NC、miR-429,并定期测量小鼠的体重。通过小动物活体成像系统像检测肿瘤的生长。HE染色观察肿瘤细胞及其形态;免疫组织化学检测蛋白表达水平,q-PCR检测miR-200b/a/429的表达水平。在体内环境下了解STAT3调控EZH2/miR200b/a/429轴影响HNSCC的侵袭和转移。结果Western blot显示在抑制STAT3的表达后EZH2表达水平也降低。q-PCR检测发现当抑制HNSCC细胞的STAT3活性时miR-200b/a/429表达随之升高。细胞免疫荧光染色评估在STAT3活性变化时细胞的EMT相关指标和细胞骨架形态的变化,活化STAT3表达时得到了相反结果。Western blot检测发现当敲低EZH2的表达后,与EZH2功能相对应的指标H3K27me3表达水平也下降,同时p-STAT3(Tyr705)表达水平发生降低。q-PCR检测到miR-200b/a/429的表达水平降低,在transwell实验和划痕实验中,干扰EZH2表达后细胞的侵袭力和迁移能力明显受到抑制。细胞免疫荧光检测发现细胞内E-cadherin及间质指标N-cadherin、Vimentin表达水平也有着对应的变化,同时细胞骨架形态发生变化,细胞的运动能力降低。在活化STAT3基础上敲低EZH2表达时,Western blot检测发现细胞侵袭和转移能力在STAT3活化时基础上明显降低。Transwell实验和划痕实验验证了IL-6的基础上干扰EZH2的表达造成细胞在此基础上侵袭和转移能力显著下降。细胞免疫荧光提示细胞的侵袭和转移能力会因EZH2下调而下降。HNSCC原位动物模型结果提示:给药组肿瘤体积小于对照组(P<0.05)。颈部局部解剖发现,有效抑制HNSCC局部侵犯;IHC结果示,给药组中p-STAT3(Tyr705)、MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin表达水平下降,E-cadherin的表达水平上调。q-PCR示:药物WP1066和DZNep处理后,miR-200b/a/429表达水平升高;药物miR-429处理后miR-429水平明显升高。结论1.在HNSCC细胞中抑制STAT3的活性会使细胞的侵袭和迁移能力下降。2.EZH2通过miR-200b/a/429调控HNSCC细胞的侵袭和转移3.活化STAT3能够促进HNSCC细胞内EZH2的表达,抑制miR-200b/a/429的转录,进而增强细胞的运动能力。4.在HNSCC细胞中EZH2表达下降会削弱STAT3的促侵袭和转移。5.STAT3抑制剂在体内环境下能有效的抑制EZH2/miR200b/a/429轴,起着抗肿瘤效果。6.EZH2抑制剂DZNep在体内环境下能有效的抑制miR200b/a/429,对抗肿瘤的效果。7.体内环境下增加miR-429的水平具有抑制头颈部鳞癌的效果。