探讨高效表达RKIP基因联合化疗药物对人喉鳞癌细胞的作用,为喉癌基因联合化疗减低喉癌化疗抵抗提供了理论依据。应用DNA克隆技术构建干涉和高效表达RKIP的重组质粒,并进行测序鉴定和效果鉴定;应用真核细胞转染技术将重组质粒转染人喉癌Hep-2细胞,观察RKIP表达水平变化对喉鳞癌细胞增殖、周期、凋亡及侵袭的影响,并分析其作用机制;高效表达RKIP的重组质粒联合顺铂后,探讨其减低喉癌化疗抵抗和增强喉癌对顺铂敏感性的可能性。(1)经酶切和测序证实,成功构建重组质粒。荧光定量RT-PCR和Western印迹检测RKIP mRNA和蛋白的表达,高效表达组升高,干涉组表达降低,其中干涉组的RKIP-shRNA501抑制作用最为明显。(2)MTT检测结果显示,高效表达组出现增殖抑制,干涉组出现增殖促进。FCM检测结果显示,高效表达组的G1期细胞增多,出现明显的凋亡峰。干涉组的G1期细胞减少,未出现明显的凋亡峰。Matrigel侵袭实验结果显示,高效表达组细胞侵袭力减弱,干涉组细胞侵袭力增强。MAPK通路的改变或许是RKIP引起喉鳞癌Hep-2细胞增殖、周期、凋亡、侵袭等改变的原因或部分原因。(3)高效表达RKIP的重组质粒联合顺铂后,MTT检测结果显示,细胞增殖受到明显抑制。FCM检测结果显示,细胞凋亡明显增强,MAPK通路的改变或许是RKIP-pIRES2-EGFP增强DDP对喉鳞癌Hep-2细胞影响的原因或部分原因。高效表达RKIP基因联合化疗对人喉鳞癌具有显著的治疗效果。