背景:心房颤动(Atrail Fibrillation,AF)是临床上最常见的快速型心律失常之一。糖尿病是AF发生的独立危险因素,但其引起AF的具体机制仍不明确,糖尿病引起的心房结构重构和电重构可能是AF发生发展的重要机制。我们前期研究结果表明,糖尿病大鼠蛋白激酶C-β(Protein kinase C-β,PKC-β)和核转录因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)蛋白表达增高,其效应因子肿瘤坏死因子-α(Tumour necrosisfactor-α,TNF-α)和转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)的表达水平升高,心房发生结构重构和电学重构,应用PKC-β抑制剂(Ruboxistaurin,RBX)能明显改善心房结构重构及电重构,减少AF的发生。但是糖尿病导致心房重构过程中PKC-β和NF-κB的相互作用关系尚不明确。目的:高糖培养小鼠心房肌(Mouse atrial myocytes cells,HL-1)细胞,应用Western Blot和实时荧光定量聚合酶联反应及干扰RNA技术,探讨PKC-β/NF-κB信号通路在糖尿病心房重构中的作用,进一步阐明糖尿病引起心房重构的机制。方法:一、培养HL-1细胞,随机分为对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖1组(25mmol/L葡萄糖)、高糖2组(33.3mmol/L葡萄糖)、甘露醇高渗对照1组(5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇)和甘露醇高渗对照2组(5.5mmol/L葡萄糖+27.5mmol/L甘露醇)。培养48小时后,提取蛋白及RNA,应用Western Blot方法和实时荧光定量聚合酶联反应检测细胞PKC-β及其下游丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinase,P38MAPK)、NF-κB、p-I-κB、TGF-β和TNF-α蛋白表达水平及mRNA表达水平。二、培养HL-1细胞,随机分为对照组、阴性对照组、阴性高糖对照组、PKCβ干扰-对照组、PKCβ干扰-高糖组。PKCβ干扰-对照组、PKCβ干扰-高糖组应用PKCβ小干扰RNA转染细胞后,分别予以5.5mmol/L葡萄糖、25.5mmol/L葡萄糖的培养基培养。各组细胞培养48小时后,提取蛋白及RNA,应用Western Blot方法和实时荧光定量聚合酶联反应检测细胞PKC-β及下游P38MAPK、NF-κB、TGF-β蛋白表达水平及mRNA表达水平。结果:一、与对照组相比,高糖组细胞PKC-β、P38MAPK、NF-κB、p-I-κB、TGF-β、TNF-α蛋白表达水平明显升高(P<0.05);TGF-βmRNA表达水平明显升高(P<0.05);PKC-β、P38MAPK、NF-κB mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),高渗组细胞PKC-β、P38MAPK、NF-κB、p-I-κB、TGF-β、TNF-α蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),PKC-β、P38MAPK、NF-κB、TGF-βmRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与高糖组相比,高渗组细胞PKC-β、P38MAPK、NF-κB、p-I-κB、TGF-β、TNF-α蛋白表达水平明显降低(P<0.05),TGF-βmRNA表达水平明显降低(P<0.05),PKC-β、P38MAPK、NF-κB mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。二、与对照组相比,阴性高糖对照组PKC-β、P38MAPK、NF-κB、TGF-β蛋白表达水平及TGF-βmRNA表达水平明显升高(P<0.05),PKC-β、P38MAPK和NF-κB mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与阴性高糖对照组比较,PKCβ干扰-高糖组PKC-β、P38MAPK、NF-κB、TGF-β蛋白表达水平明显降低(P<0.05),PKC-β、TGF-βmRNA表达水平明显降低(P<0.05),P38MAPK、NF-κB mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:一、高糖状态下PKC-β蛋白表达增多,下游炎症因子P38MAPK、NF-κB、TGF-β、TNF-α蛋白表达水平升高。二、应用siRNA-PKCβ转染细胞后,高糖状态下siRNA-PKCβ转染组细胞中PKC-β蛋白表达水平较高糖对照组明显降低,同时下游P38MAPK、NF-κB、TGF-β的蛋白表达水平明显降低,提示P38MAPK、NF-κB的表达增多可能源于PKC-β活化,沉默PKCβ的蛋白表达可以减少其下游蛋白表达。干预或抑制PKC-β激活可能成为糖尿病AF上游治疗的重要靶点。